在乳酸乳球菌的生长过程中,细菌发酵的产物如乳酸、Nisin等会作为环境中的刺激因子影响细菌的生长。作为细菌的外层屏障,乳酸乳球菌细胞壁外的表面多糖在菌株耐受性中发挥了重要作用。近来,在乳酸乳球菌中发现了一种鼠李聚糖结构,该结构与肽聚糖层共价相连,和细胞壁一起作为细菌的外层屏障发挥作用。已有研究发现乳酸乳球菌的鼠李聚糖层与细菌的环境耐受性存在关联。因此研究乳酸乳球菌鼠李聚糖层的合成调控对于提高细菌耐受性,构建高鲁棒性工程菌株具有重要意义。鼠李聚糖的合成通路主要涉及到三个部分,分别是单糖底物的合成、糖链的延长与转运,以及其它相关基因的协同,对应三个相关基因簇发挥作用。本研究首先分析了鼠李聚糖合成基因的保守性,并进行了相关启动子区的预测。耐受性实验证明过表达rmlA与rgpA可让乳酸乳球菌的耐受性提高,耐酸性分别提高至1.60和1.85倍。通过DNApull-down实验调取得到了rmlACBD、rgpABCDF以及g0181-0185启动子区的转录调控因子。实验确定了rmlA与rgpA启动子存在潜在调控因子,而g0181启动子尚未发现调控因子。DNApull-down得到的rmlA启动子区的潜在转录因子有RmaD,RliA,YbdA,YfjG,NapB。首先构建了调控因子的过表达菌株,通过qPCR确定出三个作用较为明显的转录因子:RmaD、YbdA、NapB。经过各项耐受性实验,筛选出了转录因子NapB其为与耐受性相关的鼠李聚糖调控基因的抑制子。随后进行了EMSA实验并构建LacZ报告载体,在体外与体内证明了调控因子NapB可以特异性与rmlA启动子区域结合,作为抑制子来抑制基因rmlA的表达。EMSA定位到NapB作用的motif区域:5’CCTATTTNNCAACNNTTTATCC3’。构建了缺失NapB的乳酸乳球菌敲除菌株,并进一步验证了其表型及调控作用,其中敲除napB的菌株酸耐受性提高至野生型的1.67倍。rgpA启动子区的潜在转录因子有RmaD、YbdA、RliA和YcdF。过表达菌株的qPCR确定出三个作用较为明显的转录因子:RmaD、YbdA、YcdF。随后筛选出了YcdF为鼠李聚糖调控基因rgpA的抑制子,与耐受性相关。通过EMSA实验及LacZ报告载体,在体外与体内证明了调控因子YcdF可以特异性与rgpA启动子区域结合,抑制基因rgpA的表达。进一步的EMSA实验定位得到YcdF的motif区域。通过验证了其表型及调控作用,发现缺失YcdF的菌株耐酸性提高至野生型的1.91倍。通过生物信息学技术分析了rmlA及rgpA启动子区域的保守性,绘制了转录因子NapB与YcdF的进化树,证明了其调控作用的广泛分布。