目的：构建抗CD40单链抗体(single chain Fragment variable, ScFv)的噬菌体展示文库并进行初步鉴定,为下一步获取高亲和力抗CD40单链抗体奠定基础。方法：①人重组CD40蛋白颈背部皮肤皮下注射免疫BALB/c小鼠②提取免疫小鼠脾脏总RNA,采用反转录PCR (reverse transcription PCR, RT-PCR)方法获取CD40抗体的重链可变区(Heavy Variable, VH)及轻链可变区(Light Variable,VL)基因序列。③重叠PCR (overlap-PCR OE-PCR)的方法构建单链抗体序列全长④通过双酶切及定向克隆技术将ScFv克隆入噬菌粒pCANTAB5E,构建重组质粒pCANTAB5E-ScFv⑤将构建质粒转化大肠杆菌TG1,构建原核表达文库。⑥使用M13K07辅助噬菌体拯救TG1文库,进而构建CD40-ScFv的噬菌体展示文库。结果：①成功获取免疫小鼠体内的VH、VL片段基因序列②重叠PCR构建单链抗体全长,凝胶电泳检测条带大小约750bp,条带清晰独立,证实ScFv拼接成功③构建的重组质粒pCANTAB5E-ScFv经Sfi I与NotⅠ双酶切鉴定,凝胶电泳于750bp、4200bp处可见两条条带,证实质粒构建成功。④使用辅助噬菌体M13K07侵染转化重组质粒TG1,成功构建CD40-ScFv的噬菌体展示文库,菌液涂板测定库容量约为1.75×106。⑤随机挑取阳性克隆8个扩增经测序分析,插入序列的长度及顺序正确,拼接的单链抗体序列符合鼠源抗体的基本框架结构,且具体序列各自不同。结论：成功构建CD40-ScFv的噬菌体展示文库,并对库容及其多样性进行了初步鉴定,满足后期噬菌体展示淘选要求。为下一步使用噬菌体展示技术获取高亲和力抗CD40单链抗体奠定基础。