目前已有很多关于胆盐水解酶BSH功能的报道,但对其功能机理的研究仍很缺乏。本实验室前期构建了两个菌株,其中一株是敲除了胆盐水解酶基因（bsh1）的植物乳杆菌WCFS1突变菌A,另一株是将含外源胆盐水解酶基因的重组表达质粒导入突变菌A后获得的重组菌B。研究发现,重组菌B在小鼠肠道定植能力和体外Caco-2细胞黏附性上较突变菌A都有所增强,这表明胆盐水解酶可以增强植物乳杆菌WCFS1的黏附能力。本课题针对胆盐水解酶提高植物乳杆菌WCFS1黏附的分子机理展开研究。首先,通过iTRAQ定量蛋白质组技术分析了不同胆盐处理条件下菌株A、B的蛋白质组差异,共鉴定了 1712个蛋白质。通过检索比对,在差异蛋白中找到了三个可能的黏附蛋白（F9UP14、F9UM21和F9USM7）,其编码基因依次为lp₁643、lp₀800和lp₃114。根据蛋白质组分析结果,在胆盐环境中这3个基因的表达分别上调2.9、3.5和2.6倍,均与bsh基因表达呈正相关。与非胆盐环境菌株A相比,在胆盐环境和BSH表达情况下,lp₁643上调幅度最大,高达6.9倍。最终选取lp₁643作为目标基因,对其黏附功能进行验证。目的基因lp₁643选定后,进而通过检索比对其他基因的已知黏附功能序列确定了lp₁64 基因中的6个相应序列。通过将敲除质粒pNZ5319/lp₁643转化植物乳杆菌WCFS1感受态细胞成功敲除了lp₁ 43基因的目标片段,中断了该基因中6个重复序列的表达,获得了植物乳杆菌WCFS1的lp₁643基因突变菌株D。最后,通过比较植物乳杆菌WCFS1野生菌株C和突变菌株D与结肠腺癌细胞黏附功能上的差异发现,敲除前黏附率在0.74%左右（以HT-29细胞为例）,敲除后黏附率在0.12%左右,菌株D黏附率较菌株C显著下降。因此得出lp₁643基因是影响植物乳杆菌WCFS1黏附功能的重要因素。结合蛋白质组学分析结果,进而得出胆盐水解酶通过促进lp₁643基因的表达间接提高菌株的黏附能力。综上所述,本文通过iTRAQ定量蛋白质组分析和基因敲除等手段,研究了胆盐水解酶提高植物乳杆菌WCFS1肠道黏附的分子机理,推动了胆盐水解酶功能机理的研究。