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银杏是我国最古老的树种之一。银杏花粉是银杏的雄性配子体,担任繁衍传种的重要任务,含有丰富的活性成分,营养价值极高。本论文选择银杏花粉作为研究对象,对银杏花粉包含的化学成分进行分析评价,并且探究其生理活性和保健功能,为银杏花粉的资源化利用提供基础性研究。 1.银杏花粉化学成分分析与评价 分别采用GC-MS法,UPLC-TQ-MS法和高效液相色谱法等测定银杏花粉中脂肪酸类、黄酮类、萜内酯类和银杏酸类化合物的含量。 1.1.银杏花粉脂肪酸类成分分析与评价 对银杏花粉总脂肪和脂肪酸含量进行测定,结果显示银杏花粉中总脂肪含量为2.4%,采用GC-MS法对粗脂肪中的脂肪酸进行分析测定,结果棕榈酸含量为6.3%,亚麻酸3.1%,油酸为57.6%,亚油酸为3.2%。推测银杏花粉可能具有抗前列腺增生的功效。 1.2.银杏花粉黄酮类成分分析与评价 采用UPLC-TQ-MS法对银杏花粉黄酮类化合物含量进行测定,结果显示银杏花粉中穗花杉双黄酮含量(87.4μg/g)显著高于银杏叶(31.6μg/g),其山柰酚含量高达222.1μg/g,约为叶中含量的14倍。并且银杏花粉中的芹菜素含量(48.5μg/g)也高于叶中(28.0μg/g)。推测银杏花粉可能有抗炎抗肿瘤和保肝的功效。 1.3.银杏花粉内酯类成分分析与评价 采用UPLC-TQ-MS法对银杏花粉内酯类化合物含量进行测定,结果显示银杏花粉含有银杏内酯A(12.7μg/g)、银杏内酯B(38.6μg/g)、银杏内酯C(93.4μg/g)和白果内酯(55.4μg/g)。银杏内酯A对缺血损伤和中枢神经系统具有保护作用;银杏内酯B具有抗炎和抗氧化等功效;银杏内酯C能够治疗心脏病;白果内酯对神经系统类疾病有治疗和预防作用。银杏花粉中富含的内酯类成分提示其可能具有的功效,为银杏花粉的功能开发提供基础研究。 1.4.银杏花粉银杏酸类成分分析与评价 采用高效液相色谱法(HPLC)测定银杏花粉中银杏酸含量。银杏花粉中总银杏酸含量达到0.6%,由于银杏酸容易损伤细胞,破坏机体免疫系统,在银杏花粉的资源化利用过程中,应采用合理的分离与富集工艺,即可保证黄酮类、内酯类物质的安全有效利用,又可获得银杏酸类物质并将其用于生物农药等的开发利用,以达到充分、合理、有效的资源化利用。 2.银杏花粉生物活性评价 2.1.银杏花粉抗氧化活性评价 采用DPPH、FRAP等方法测定银杏花粉体外抗氧化能力,并且采用MTT法研究银杏花粉提取物对H2O2损伤的PC12细胞的保护作用。当H2O2浓度为2.50 mmol/L时对细胞抑制率为53.25%。选取此浓度的H2O2对PC12细胞进行损伤造模,同时给药组加入不同浓度的银杏花粉醇提物和水提物,结果给药组的细胞存活率较模型组高,说明银杏花粉提取物对H2O2损伤的PC12细胞有保护作用。 2.2.银杏花粉保护心脑血管活性评价 采用MTT法研究银杏花粉提取物对阿霉素损伤的H9c2细胞的保护作用,当阿霉素浓度为1.00 mol/L时对细胞抑制率为45.64%。选取此浓度的阿霉素对H9c2细胞进行损伤造模,同时给药组加入不同浓度的银杏花粉醇提物和水提物,结果给药组的细胞存活率较模型组高,说明银杏花粉提取物对阿霉素损伤的H9c2细胞有保护作用。 2.3.银杏花粉保肝活性评价 采用MTT法研究银杏花粉提取物对乙醇损伤的LO2细胞的保护作用,当乙醇浓度为10%时对细胞抑制率为47.90%。选取此浓度的阿霉素对LO2细胞进行损伤造模,同时给药组加入不同浓度的银杏花粉醇提物和水提物,结果给药组的细胞存活率较模型组高,说明银杏花粉提取物对阿霉素损伤的LO2细胞有保护作用。