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研究目的通过研究第二代新型水溶性光敏剂HCE6的光谱特性和HCE6介导的光动力治疗（HCE6-PDT）在人胆管癌FRH0201细胞中的细胞毒性作用和初步机制以及内在联系,为其在胆管癌的诊治建立扎实的理论基础。研究方法第一部分:紫外/荧光分光光度计检测HCE6在Tris-HCl-NaCl缓冲液中的光谱特性,进一步检测光敏剂浓度和溶剂pH值对HCE6光谱特性的影响。第二部分:流式细胞术观察FRH0201细胞对HCE6的摄取;CCK-8检测单独HCE6、单独光照和HCE6-PDT在人胆管癌FRH0201细胞中的细胞光毒性和在1.49、4.47、7.45 J/cm2光照强度下的IC50,并选择合适的光照强度和光敏剂浓度作为后续实验组。CCK-8检测其他肿瘤细胞和正常细胞在4.47 J/cm2光照强度下的IC50。倒置显微镜查看FRH0201细胞状态变化、DAPI单染和AO/EB双染荧光显微镜下注意细胞凋亡形态的变化,Annexin V/PI双染法在流式细胞仪上测定FRH0201细胞的总凋亡率,Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白Cleaved Caspase 3的蛋白水平,探索HCE6-PDT诱导FRH0201细胞是否发生凋亡。同时,Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞坏死率,探索HCE6-PDT诱导FRH0201细胞是否发生坏死。荧光显微镜观察GFP-LC3绿色荧光,是否产生自噬,Western Blot检测细胞自噬相关蛋白LC3的水平,探索HCE6-PDT诱导FRH0201细胞是否发生自噬。用DCFH-DA荧光标记并观测胞内活性氧（ROS）的含量。使用自噬抑制剂氯喹（CQ）试剂减少自噬的产生,Annexin V/PI双染法在流式细胞术上测定细胞总凋亡率,Western Blot检测细胞凋亡相关蛋白Cleaved Caspase 3的水平,探索HCE6-PDT诱导FRH0201细胞的凋亡与自噬的关系。研究结果第一部分:HCE6在Tris-HCl-NaCl缓冲液（50 Mm,PH=7.2）溶剂中的吸收光谱,在300-700nm波长之间,共有三个吸收峰,分别在398、499、649nm左右处。在398nm激发波长下有且只有一个强荧光发射波峰,位于652nm左右处。2.5、5、10μg/ml的HCE6光敏剂在各吸收光谱波峰和荧光发射波峰呈线性关系,相关系数均大于0.999。随着溶剂pH值的增大,吸收波峰峰值增大,荧光激发强度也随之增大,并且荧光发射波长从640nm处红移至653.6nm。第二部分:FRH0201细胞饱和摄取HCE6时间为4小时。CCK-8检测单独HCE6和单独光照对FRH0201细胞无细胞毒性作用,HCE6-PDT对肿瘤细胞有细胞毒性作用,呈光敏剂浓度和光照强度依赖性。我们选取HCE6光敏剂浓度1.303μg/mL,光照强度为4.47 J/cm2作为后续实验的治疗组（HCE6-PDT组）。HCE6-PDT能诱导FRH0201细胞的凋亡,细胞形态发生凋亡样改变,细胞凋亡率增加,细胞凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3水平增加。同时,HCE6-PDT能诱导FRH0201细胞的坏死率增加。HCE6-PDT能诱导FRH0201细胞的自噬,GFP-LC3绿色颗粒荧光在胞膜上显示,细胞自噬相关蛋白LC3-II/LC3-I水平增加。HCE6-PDT能诱导FRH0201细胞产生ROS。使用自噬抑制剂CQ后,细胞凋亡率显著下降。结论:（1）HCE6可能可作为光动力诊断剂;（2）HCE6-PDT对体外FRH0201细胞有显著细胞毒性,并呈光敏剂浓度和光照强度依赖性;（3）HCE6-PDT诱导FRH0201细胞凋亡和自噬;（4）在HCE6-PDT诱导FRH0201细胞作用中,自噬可能促进细胞凋亡。