论文部分内容阅读
目的：随着微波技术的迅猛发展，其在日常生活中应用越来越广泛，对人类健康的危害亦日益受到关注。既往研究发现，睾丸是微波辐射的敏感靶器官之一，但其损伤分子机制不明确。本课题旨在探讨cAMP-CREB/CREM通路及调控在微波辐射致生精细胞损伤中的作用，为损伤防治提供思路。方法：90只二级雄性Wistar大鼠和离体培养GC-2spd细胞经0、10和30mW/cm~2微波辐射辐射2周（5次/周，15min/次），分别于辐射后6h~28d和1h~24h，采用光镜、电镜、精子动态分析系统、MTT、TUNEL、FCM、ELISA、Western Blot及图像分析等仪器和方法，探讨微波辐射后生精细胞的改变，cAMP-CREB/CREM通路信号分子、靶基因及其调控因子变化在生精细胞损伤中的作用。结果：（1）血清睾酮含量于30mW/cm~2微波辐射后1~3d明显降低。（2）10和30mW/cm~2微波辐射后1d和7d，睾丸生精细胞凋亡明显增加，S期细胞比例减少；28d内见生精细胞变性、坏死、脱落，多核巨细胞形成等，超微结构见精原细胞、Leydig细胞染色质凝集边移，各级生精细胞线粒体肿胀，精子头部形态异常等。（3）10和30mW/cm~2微波辐射后1d、14d和6h~14d，附睾AB级精子比例明显下降，D或C级精子比例明显增加，精子活力参数VAP、BCF和VCL、VSL明显下降；6h~1d和6h~7d时精子畸形率明显增加。（4）10和30mW/cm~2微波辐射后睾丸组织cAMP含量降低（7~28d），PKA活性升高（3~7d）或降低（14~28d），CREM（6h~1d）和p-CREB（7~14d）表达明显下调。（5）10和30mW/cm~2辐射后6h~1d及7d~14d睾丸组织LTESK1和LDH-C表达均明显下调。（6）10和30mW/cm~2辐射后6h~28d睾丸组织TORC1表达明显上调；1d~7d和28dACT表达明显下调。（7）10和30mW/cm~2微波辐射后1~12h GC-2spd细胞增殖活力降低，辐射后6h细胞凋亡率明显增加，超微结构见细胞染色质凝集边移和细胞坏死，内质网明显扩张等。（8）10和30mW/cm~2微波辐射后GC-2spd细胞cAMP含量明显降低（6h和24h），PKA活性明显下降（10mW/cm~26h）或升高（30mW/cm~21~24h），CREM表达明显下调（1h和6h）或上调（24h），p-CREB表达明显上调（10mW/cm~21~24h，30mW/cm~21~6h）或下调（30mW/cm~224h）。（9）10和30mW/cm~2微波辐射后GC-2spd细胞TESK1表达明显上调（1h）或下调（6h和24h），LDH-C表达上调（1h和6h）或下调（24h）。（10）10mW/cm~2微波辐射后1h和6h GC-2spd细胞ACT的表达明显上调；30mW/cm~2辐射后ACT的表达明显下调（1h和24h）或上调（6h）；10和30mW/cm~2微波辐射后1h，GC-2spd细胞TORC的表达明显下调；辐射后6h和24h均明显上调。结论：10和30mW/cm~2微波辐射：（1）大鼠血清睾酮降低，睾丸生精细胞和培养GC-2spd损伤及附睾精子参数异常。（2）cAMP-CREB/CREM通路受抑制，信号分子及靶基因表达下调在生精细胞损伤中发挥重要作用。（3）ACT和TORC表达异常参与cAMP-CREB/CREM信号通路的调控。