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本文章在细胞水平上研究了僵蚕(Bombyx batrvticatus)醇提物(BBE)对HzAM1、SMMC-7721两种细胞的致毒作用差异,并深入探讨了BBE诱导肿瘤细胞凋亡的机理。MTT检测结果表明,BBE对昆虫细胞HzAM1细胞活力影响较小、无明显毒性。但BBE对SMMC-7721细胞活力抑制具有时间和浓度的依赖。当BBE浓度在0.1-1.0 mg/mL范围内,BBE对细胞抑制率随着浓度和处理时间的增加而增强,且当BBE处理细胞 12 h、18 h、24 h、30 h 时,IC50 分别为 0.8886 mg/mL,0.5998 mg/mL,0.3988 mg/mL 和 0.1812 mg/mL。当1.0 mg/mL BBE处理细胞 24 h 时,BBE 对细胞抑制率达到90%以上。观察细胞形态发现,BBE处理HzAM1后,细胞形态保持正常。而SMMC-7721细胞形态随着BBE浓度的增加细胞形态发生明显变化。0.6 mg/mL BBE处理SMMC-7721细胞24 h后,细胞形态遭到严重破坏,增殖变缓,细胞开始脱壁,内容物溢出,变圆并皱缩。为了进一步明确BBE对肿瘤细胞的特异性凋亡诱导作用,对 BBE诱导SMMC-7721细胞凋亡的具体途径进行了深入探讨。以下为主要结果:激光共聚焦显微镜观察发现,当0.6 mg/mLBBE处理细胞3h时,只有细胞膜发出绿色荧光,细胞出现早期凋亡;当BBE处理时间增至6h、12 h,细胞膜发出绿色荧光的同时,PI能够进入细胞核将核染成红色,细胞核也发出红色荧光,出现晚期凋亡。说明BBE足通过先破坏细胞膜,进而破坏细胞核的途径诱导细胞凋亡发生。流式细胞仪检测细胞凋亡率结果表明:当0.1 mg/mL-0.6 mg/mL BBE处理细胞18 h,细胞总凋亡率分别为 1 7.2%,30.3%,35.1%和 38.6%,呈上升趋势。DNA fragmentation 检测结果表明:BBE能够促使SMMC-7721细胞染色体DNA断裂成小片段DNA,当BBE浓度由0.2 mg/mL增加至0.5 mg/mL时,DNA的断裂程度随着浓度的增加而增强。BBE对细胞Bax、Bcl-2和P21基因表达水平影响分析结果显示,0.1 mg/mL-0.6 mg/mL BBE,处理细胞18 h后,Bax和P21在mRNA水平和蛋白表达水平上随着浓度增加,表达量显著升高,而Bcl-2的表达量随着BBE浓度增加明显降低。说明BBE促进Bax/Bcl-2、P21在细胞中的表达是诱导细胞凋亡的分子途径之一。