糖胺聚糖活性适体制备及其应用研究

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糖胺聚糖,也称酸性粘多糖,是由重复的二糖单位构成的,其二糖单位之一是氨基己糖。肝素是一种具有抗凝血活性的糖胺聚糖,是世界上最有效和临床用量最大的抗凝血药物,其原料主要来源于猪的小肠粘膜,目前,肝素临床用药主要采用注射给药方式,对肝素原料的纯度要求较高,方可保证制剂的用药安全,因此,如何研究绿色环保、成本低廉的肝素纯化新技术成为肝素制剂的关键问题。SELEX技术即指数富集的配基系统进化技术,是从体外人工合成的寡核苷酸文库中筛选获得与靶分子特异性亲和的一段寡核苷酸序列。本课题研究通过体外合成一个具有25个随机碱基的寡核苷酸序列库,采用SELEX技术,从中筛选能与肝素特异性亲和作用的核酸序列,将筛选得到的DNA序列进行克隆、测序,通过DNAMAN软件对其一级结构、二级结构进行分析,测定克隆子与肝素的亲和力。实验结果表明,经过25轮筛选,共得到20个克隆子,获得3个高频适配子。软件分析预测其二级结构为茎环状结构,说明茎环结构是适配体与靶分子结合的基础。对3条序列建立酶联免疫吸附试验,检测结果表明,H29与肝素结合的亲和力达到0.528,亲和性较高。肝素特异性适体的获得为今后解决肝素制药难点提供了新思路,新工艺。
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