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玫瑰黄链霉菌(Streptomyce roseoflavus) Men-myco-93-63是分离自马铃薯疮痂病自然衰退土壤的一株生防链霉菌,多年室内及田间试验表明该菌株及其发酵液对棉花黄萎病、瓜类白粉病、蔬菜线虫病等农作物重要病害均有很好的防效,杀菌谱广,效果稳定。本研究对其发酵所产生的抗生素进行了分离及结构鉴定,并在此基础上以抗生素产量为指标,对发酵培养基进行了优化,得到的主要结果如下: 1、从玫瑰黄链霉菌(Streptomyce roseoflavus) Men-myco-93-63发酵液沉淀中分离得到一组对棉花黄萎病菌有明显抑制作用的活性物质,外观为黄色粉末状。HPLC谱图显示活性物质主要由三种化合物组成,并且三种化合物有着相同的紫外可见吸收光谱,最大吸收峰都在363nm,且在260 nm附近有微弱的次级吸收峰。试验证实该组物质存在光不稳定性质。于是在避光条件下,经制备HPLC对其中含量较高的两个组分进行分离制备,得到纯度分别为97.15%和96.05%的两个化合物纯品,再通过高分辨质谱(HRMS)及核磁共振(NMR)方法,确定两个化合物分子量分别为738和752,并鉴定出两个化合物结构,二者均为五烯大环内酯类抗生素,其中一个为报道的已知化合物Roflamycoin。另一个在结构上只比Roflamycoin多一个亚甲基,目前尚未发现报道。 2、采用菌丝生长速率法和抑菌圈法测定了该抗生素粗品的抑菌谱,其对17种供试植物病原真菌均具有较强抑制作用,毒力测定结果EC50介于1.82 mg/L~12.18mg/L之间,对疫霉菌效果较差,EC50值为69.78 mg/L,对供试的致病细菌和致病放线菌未表现出抑菌作用。 3、探究了紫外分光光度法测定发酵液中抗生素粗品含量的可靠性和准确性。具体方法为:向发酵液中加入4倍体积的乙醇,充分振荡混匀,并超声提取5 min,之后12000 r/min离心3 min,取上清液稀释后在363 nm波长下测定吸光度。抗生素粗品浓度在3.2~25.8μg/mL范围内与吸光度值线性关系良好。 4、从实验室现用的两种培养基中选择出抗生素产量较高的菌丝培养基,以之为初始发酵培养基,采用Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验和中心组合试验,以抗生素产量为指标,对培养基组分进行优化,得到优化后的培养基组成为葡萄糖2%,可溶性淀粉1%,花生饼粉4.96%,玉米浆2.66%,氯化钠0.4%,碳酸钙0.3%,磷酸二氢钾0.02%。经验证,抗生素粗品产量达到2030.6 mg/L,较优化前的771.9 mg/L提高了163%。