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目的：研究髓系肿瘤骨髓增生异常综合征(myelodysplasticsyndrome,MDS)、急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia,AML)和慢性髓系白血病(chronicmyeloidleukemia,CML)患者中螺旋酶抗原(helicaseantigen,HAGE)基因启动子区域的甲基化状况,并分析其临床相关性。
方法：应用实时定量PCR(real-timequantitativePCR,RQ-PCR)技术检测27例MDS患者、78例AML患者、35例CML患者及24例缺铁性贫血(IDA)对照组骨髓单个核细胞标本的HAGEmRNh水平。应用实时定量甲基化特异性PCR(real-timequantitativemethylation-specificPCR,RQ-MSP)技术检测90例MDS患者、214例AML患者、87例CML患者及24例IDA对照组骨髓单个核细胞标本的HAGE基因启动子未甲基含量。应用亚硫酸氢盐测序(bisulfitesequeficing)分析MDS、AML患者HAGE启动子和第一外显子的甲基化密度。
结果：造血系统髓系肿瘤中存在不同程度的HAGE基因低甲基化:
①90例MDS患者中27例(30%)存在HAGE基因低甲基化,HAGE基因甲基化改变与患者年龄、性别、白细胞计数、血小板计数均无相关性(P＞0.05),但低甲基化患者的血红蛋白水平明显低于甲基化患者(P=0.047);低甲基化频率与患者的FAB分组、WHO分型和IPSS分组无相关性(P＞0.05),但在核型正常的病人中,HAGE低甲基化病人的总体生存时间(未获得中位数)明显长于甲基化病人(中位数16月,可信区间4.9～27.1月)(X2=3.906,P=0.048);HAGE未甲基化水平与HAGE转录本水平正相关(r=0.520,P=0.005);RQ-MSP结果和亚硫酸氢盐测序结果高度相关。标本总体甲基化密度和HAGE表达负相关:1例HAGE表达阴性的对照标本高度甲基化,而2例HAGE表达阳性的MDS标本甲基化程度明显降低。
②214例AML患者中32例(15%)为HAGE低甲基化;男性患者中HAGE低甲基化频率(19.5%,24/123)高于女性患者(8.8%,8/91)(P=0.033),低甲基化频率与患者的年龄、白细胞计数、血红蛋白水平和血小板计数均无相关性(P＞0.05);FAB分型中,HA6E低甲基化频率为M3＞M6＞M4＞M5＞M1＞M2,组间差异有统计学意义(P=0.019);核型危险分级中HAGE低甲基化频率表现为低危组(22.4%)＞中危组(15.7%)＞高危组(0%),组间差异有统计学意义(P=0.013)。T(15;17)患者HAGE低甲基化频率(33.3%)明显高于其他组(13.6%)(P=0.005),11q23重排/复杂异常/t(9;22)患者中HAGE启动子低甲基化频率明显低于其他组(P=0.01);HAGE未甲基化水平与HAGE表达水平正相关(r=0.277,P=0.014);RQ-MSP结果和亚硫酸盐测序结果高度相关,且标本总体甲基化密度和HAGE表达负相关。
③87例CML患者中22例(25.3%)存在HAGE启动子低甲基化,低甲基化频率与患者年龄、性别、白细胞计数、血红蛋白含量、血小板计数及染色体异常分组均无相关性(P＞0.05);慢性期、加速期、急变期患者HAGE启动子低甲基化频率分别为23.4%(15/64)、25.0%(2/8)、33.3%(5/15),三组间差异无统计学意义(P＞0.05);HAGE未甲基化水平与HAGE转录本水平正相关(r=0.469,P=0.004)。
结论：①HAGE启动子低甲基化是造血系统髓系肿瘤MDS、AML和CML患者中的一个常见分子事件;②HAGE启动子低甲基化是MDS患者中预后良好的一个分子标记;③HAGE启动子低甲基化与AML低中危核型密切相关。