牛干扰素—γ基因的克隆、序列分析及其表达产物的生物学活性研究

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根据GenBank上发表的牛干扰素γ基因序列设计引物。从牛外周血淋巴细胞中提取基因组RNA,采用RT-PCR技术,扩增出干扰素γ基因并进行了序列分析。琼脂糖凝胶电泳显示牛干扰素γ扩增片段约为500bp。序列分析结果表明,牛干扰素γ基因序列全长517bp,开放阅读框架内含501个核苷酸,共编码166个氨基酸,分子量19.4kd,与参考序列完全一致。克隆序列经BamHI/EcoRI双酶切后连接到经相同酶切的pBV220质粒上,转化大肠杆菌DH5a,筛选阳性克隆菌进行温度诱导表达,经SDS-PAGE分析,在约19.4kd处有表达蛋白带,表达产物经免疫荧光染色鉴定为阳性。生物学活性研究表明:重组牛γ-干扰素对牛外周血淋巴细胞具有抑制其分裂及抗其凋亡的作用。
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