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背景:肿瘤耐药是影响化疗疗效的重要原因,对耐药机制的研究是逆转耐药现象、提高化疗疗效的重要基础。多西紫杉醇是近年来用于治疗非小细胞肺癌疗效较好的药物之一,但肺癌细胞对多西紫杉醇耐药性的产生限制了其临床疗效。以往关于紫杉类药物耐药机理的研究包括药物作用靶点改变、胞内药物浓度降低、药物靶分子下游信号途径改变及细胞周期调控等。近期大量研究表明,抗凋亡作用也是多种肿瘤细胞耐药的重要机制。本研究以耐多西紫杉醇人肺腺癌细胞SPC-A1/Docetaxel为对象,探讨凋亡抵抗在肺癌细胞对多西紫杉醇耐药中的作用。
目的:通过比较人肺腺癌细胞SPC-A1与其多西紫杉醇耐药细胞系SPC-A1/Docetaxel经多西紫杉醇诱导后凋亡率及凋亡相关因子bcl-2、bax水平的差异,研究抗凋亡机制在肺腺癌多西紫杉醇耐药中的作用。
方法:Annexin V/PI双标流式细胞术检测SPC-A1/Docetaxel细胞与SPC-A1细胞经不同浓度多西紫杉醇诱导后的凋亡率,免疫组化法及RT-PCR法分别检测SPC-A1/Docetaxel细胞与SPC-A1细胞bcl-2、bax在蛋白和mRNA水平的表达。
结果:SPC-A1/Docetaxel细胞与SPC-A1细胞的自然凋亡率分别为(7.5±1.1)%和(4.7±0.7)%,经5μ g/L、10μ g/L、20μ g/L的多西紫杉醇作用48小时后,SPC-A1/Docetaxel细胞早期凋亡率依次为(7.8±2.1)%,(11.3±3.1)%和(25.6±4.5)%,SPC-A1细胞早期凋亡率依次为(23.7±4.5)%,(44.2±5.0)%和(40.9±2.8)%,各组SPC-A1/Docetaxel细胞的早期凋亡率均显著低于SPC-A1细胞(P<0.05)。免疫组化结果显示:SPC-A1/Docetaxel细胞中bcl-2蛋白染色评分(3.67±0.42),bax蛋白染色评分(2.07±0.31),SPC-A1细胞中bcl-2蛋白染色评分(2.20±0.20),bax蛋白染色评分(3.53±0.31),耐药株bcl-2蛋白表达较亲本株明显升高(P<0.05),而bax蛋白表达明显降低(P<0.05)。RT-PCR结果显示,SPC-A1/Docetaxel细胞的bcl-2 mRNA相对灰度值为(1.28±0.19),较SPC-A1细胞(0.87±0.15)显著增高(P<0.05);SPC-A1/Docetaxel细胞的baxmRNA相对灰度值为(0.83±0.08),较SPC-A1细胞(1.10±0.04)显著增高(P<0.05)。
结论:凋亡抵抗可能是肺腺癌SPC-A1/Docetaxel细胞多药耐药的机制之一,且与抗凋亡因子bcl-2表达上调和促凋亡因子bax表达下调相关。