目的:人食管下括约肌(LES)是位于食管胃连接部特殊增厚的环形肌,其宽度约2-3cm。Liebermann-Meffert等首次提出人LES由位于胃小弯侧呈半环形的钩状纤维(clasp fibres)和位于大弯侧呈斜行分布的套索纤维(sling fibres)共同构成,这两束肌纤维与膈脚一起在食管胃结合部形成高压带,维持LES的关闭状态,使LES形成一种类似单向阀门的结构。正常状态下,由于LES的持续性收缩使胃内容物不能反流入食管,另一方面,由于LES的适时舒张允许了食物继续下行入胃,或呕吐和打嗝,使胃内的液体或气体反流如食管并经口腔排出。LES的收缩和舒张功能调节机制非常复杂,包括了神经系统、体液因素及自身肌源性等多种因素。G蛋白是细胞跨膜信号转导系统的重要组成部分,绝大多数肽类激素都是通过G蛋白传导通路发挥作用的。在神经递质物质中,除了几种氨基酸递质外,其余的神经递质物质,都主要是以在突触后细胞中产生第二信使类物质来完成跨膜信号转导的。有些被激活的G蛋白也可以直接调控一些通道的功能状态,改变膜的反应。不同的外界信号通过膜受体在膜内生成第二信使来进行跨膜信号转导的,都需要通过结构类似的各种G蛋白的介导。胃动素和胃泌素激活大鼠胃窦平滑肌细胞膜的Gi-3蛋白,继而引起平滑肌细胞的收缩。促胰液素引起的大鼠胃平滑肌细胞的舒张由Gs蛋白介导。但目前国内外对人LES受体类型及其分型以及调节机制的研究,主要局限于胆碱能受体,对于G蛋白的研究则相对甚少。现有的对人食管下括约肌(LES)的研究也主要是针对动物(大鼠等),与人有着种属,生理学的差异,对于人LES的G蛋白的表达规律及调节机制的相关研究则未见报告。本实验采用蛋白印迹法(Western-blot)研究人LES的G蛋白的Gi-3、Go、Gq11、Gs亚型在套索纤维、钩状纤维、食管环行肌和胃底环行肌中的表达规律,为进一步研究人LES调节机制奠定基础,为食管运动功能障碍性疾病的临床治疗提供理论依据。方法:1选取2008年12月到2009年10月在我院因高位食管中段癌行食管大部切除术患者30例。手术室采集新鲜食管胃连接部手术标本,锐性剥去胃贲门部及食管下段的粘膜层及粘膜下层后,制备套索纤维(S)、钩状纤维(C)、食管体部环行肌(E)和胃底环行肌(G)的肌条;2按照100ul TBS /10mg标本的比例加入TBS, 4℃条件下用组织匀浆器加入TBS液匀浆,匀浆液(4℃,1000×g)离心10分钟。弃上清后,以美国PIERCE公司的膜蛋白提取试剂盒制备膜受体蛋白,BCA法定量,调整蛋白至相同浓度后,应用电泳仪电泳,分离出与4种G蛋白亚型的分子量大小相应的蛋白后转膜,最后应用G蛋白亚型抗体行Western blot检测蛋白的表达,并分析IOD值。结果:Western blot四种G蛋白亚型有其相应蛋白条带的表达,分别是Gq /11、Gi-3、Go、Gs,分子量分别为41kDa、45kDa、40kDa、48kDa。相同肌条不同亚型蛋白表达的IOD值在clasp fibers (C)中两两比较,Gi-3较Go、Gq11、Gs的表达少。相同亚型在各肌条间没有蛋白表达的差异。结论:1.四种G蛋白亚型在钩状纤维(C)、套索纤维(S)、食管环形肌(E)、胃底环形肌(G)的肌条中均有表达。2.每一种肌束中的四种亚型的表达水平有差异。在钩状纤维(C)中Gi-3较Go、Gq11、Gs的表达少。在套索纤维(S)、食管环形肌(E)、胃底环形肌(G)中四种亚型的表达量无统计学差异。3.相同亚型在各肌条间蛋白的表达无差异。