MicroRNA (miRNA)是由约22个核苷酸组成的内源性非编码小分子RNA,广泛存在于真核细胞中。多项研究表明,miRNA在植物-病原物互作过程中起着至关重要的调控作用。番茄是常见的经济作物,世界各地均有大面积种植,由致病疫霉引起番茄晚疫病常给番茄生产造成严重损失。随着miRNA研究技术的不断完善,高通量测序技术因其独特的优势逐渐被广泛应用于miRNA的挖掘中。miR396是植物中特有的一类保守miRNA,虽有文献证明其在番茄中存在,但目前仍没有关于它在番茄中功能特性的研究报道。因此,基于上述研究需要,本研究利用高通量测序方法构建了2个番茄小RNA文库,并分析了miR396在番茄抗病抗逆中的作用。首先,本研究通过高通量测序方法构建了致病疫霉诱导下的2个番茄小RNA文库,获得了230个已知和67个新的miRNA;差异表达分析显示118个miRNA在致病疫霉侵染下表达量变化明显；随后又采用实时定量PCR验证了11个miRNA的表达。靶基因预测及分析表明这些miRNA参与植物-病原物互作过程。其次,本研究从构建的文库中挑选出可能与抗病相关的miR396,通过生物信息学方法分析了番茄miR396的特性并采用实时定量PCR分析了它在致病疫霉、激素、高盐、干旱胁迫下的表达特性。结果表明,miR396均能对上述胁迫条件作出响应,并在致病疫霉处理下变化最为明显。为进一步了解miR396的功能特性,本文从番茄中克隆了MIR396基因,并且构建了相应的植物表达载体。miR396在番茄中的瞬时表达表明,本研究构建的表达载体能够成功转录MIR396基因,并且过表达miR396提高了番茄抗晚疫病的能力；将此表达载体转化烟草植株后发现,miR396的过表达抑制了烟草中靶基因的表达。总之,本研究首次从miRNA的角度寻找番茄晚疫病的防治途径,并首次系统地分析了番茄中miR396的表达特性及功能,为番茄抗病研究提供了新的思路。