【摘 要】
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目的:探讨新型短肽FLPNF对FK506诱导的INS-1细胞凋亡是否存在保护作用,以及对INS-1细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌功能的影响。方法:选取大鼠胰岛素瘤细胞系INS-1细胞为研究对象。实验分为空白对照组（Control组）、短肽FLNPF组、阳性对照组（Ghrelin组）、阴性对照组（非相关短肽NFGAIL组）、FK506组、短肽FLPNF+FK506组、阳性对照Ghrelin+FK506组、
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目的:探讨新型短肽FLPNF对FK506诱导的INS-1细胞凋亡是否存在保护作用,以及对INS-1细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌功能的影响。方法:选取大鼠胰岛素瘤细胞系INS-1细胞为研究对象。实验分为空白对照组（Control组）、短肽FLNPF组、阳性对照组（Ghrelin组）、阴性对照组（非相关短肽NFGAIL组）、FK506组、短肽FLPNF+FK506组、阳性对照Ghrelin+FK506组、阴性对照NFGAIL+FK506组。通过CCK-8法检测各组INS-1细胞的增殖活性;通过Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测各组细胞的凋亡百分比;ELISA方法检测各实验组INS-1细胞葡萄糖刺激胰岛素分泌功能（GSIS）的变化;western blotting方法检测三种凋亡相关蛋白bcl-2、bax和caspase3表达情况的变化。实验数据通过Graph Pad Prism 5.0进行统计学分析,p<0.05差异具有统计学意义。结果:在单独使用FK506作用于细胞时,INS-1细胞的增殖活力出现了显著的降低,同时细胞凋亡率上升,凋亡相关蛋白bcl-2表达量减少,而bax和caspase3表达量增加,葡萄糖刺激胰岛素分泌量减少,说明FK506能够诱导INS-1细胞发生凋亡且能够使INS-1细胞的葡萄糖刺激胰岛素分泌功能下降。单独使用短肽FLPNF处理细胞时,与空白对照组（Control组）相比,INS-1细胞的增殖活性和细胞凋亡率未发生明显改变,凋亡相关蛋白的表达量也未出现明显变化,葡萄糖刺激胰岛素分泌量也未见明显改变。使用短肽FLPNF预处理INS-1细胞再使用FK506刺激细胞,与单独使用FK506相比较,发现INS-1细胞的增殖活性明显改善,细胞凋亡百分率下降,凋亡相关蛋白bal-2的表达量上调,而bax和caspase3的表达量下调,INS-1细胞的葡萄糖刺激胰岛素分泌功能得到改善。与阳性对照组Ghrelin组相比较,单独使用短肽FLPNF处理细胞时,各项指标的结果未出现明显差别;与阴性对照组非相关短肽NFGAIL组相比较,使用短肽FLPNF预处理INS-1细胞后再添加FK506刺激细胞时,INS-1细胞的增殖活性提高,细胞凋亡百分率降低,凋亡相关蛋白bcl-2的表达量增加,bax和caspase3的表达量减少。结论:1、短肽FLPNF明显增加FK506毒性作用下的INS-1细胞增殖活性,并能够改善INS-1细胞的葡萄糖刺激胰岛素分泌功能。2、短肽FLPNF明显减少FK506诱导的INS-1细胞凋亡,上调bcl-2蛋白表达,下调bax和caspase-3蛋白表达。
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