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目的 过对新生树鼩接种不同滴度人HBV血清,建立树鼩慢性乙肝感染模型;通过观察接种HBV后树鼩体内的细胞因子IL-10及IL-18的表达情况,探讨HBV感染的致病机制,同时为HBV感染树鼩模型的优化提供实验依据。方法:第一部分 过新生树鼩接种两种不同滴度的人HBV构建树鼩慢性HBV感染模型。将新生健康树鼩以窝为单位随机分为3组:中滴度组接种HBV DNA10~4~10~6copies/ml、高滴度组接种HBV DNA10~7~10~8copies/ml含病毒血清(各16只),均经臀大肌皮内注射;6只未接种设为对照组。出生8周起定期采血及肝活检术取肝组织(ECLIA检测乙肝免疫标志物、PCR荧光探针法检测HBV DNA的含量);利用免疫组化法观察肝组织中HBsAg及HBcAg的表达情况,同时观察肝组织病理变化。第二部分观察感染效率较高的动物组体内IL-10及IL-18的水平变化情况。将16只动物中,HBsAg阳性和/或HBV DNA阳性的树鼩纳入感染组,6只未接种者为对照组。比较感染组与对照组体内IL-10及IL-18的动态变化情况:(1)应用ELISA检测两组动物血清中IL-10及IL-18第8、12、16、20、24周的表达变化;(2)应用实时荧光定量PCR检测肝组织中IL-10及IL-18 m RNA的表达情况;(3)应用免疫组织化学法观察感染组及对照组动物肝组织内IL-10及IL-18的表达情况。结果:第一部分 接种后36周的观察周期内,中、高滴度组体现出不同的感染效率。具体结果为:(1)血清eclia结果:中滴度组自第8周后开始有8只(50%)先后检测到hbsag阳性,其中1只(6.25%)同时伴hbeag阳性,2只(12.5%)同时伴hbeab阳性。hbsag阳性绝大部分在感染后第8周可检测出,1只在第10周可检测到,大多数持续至第16周后转为阴性。高滴度组自第8周后有5只(31.25%)先后检测到hbsag阳性,其中4只(25%)同时伴hbeag阳性,1只(6.25%)同时伴有hbsab、hbeab阳性。hbsag阳性大部分在感染后第8周可检测出,1只在第14周可检测到,hbsag阳性持续时间不等,最短持续至第14周,最长者持续至第36周。(2)血清hbvdna结果:中等滴度组在36周的观察期内hbvdna均为阴性。高等滴度组中,有10只(62.5%)于第8周开始陆续检测到hbvdna阳性,且多数维持在10~2~10~3copies/ml水平,少数可达到10~4copies/ml水平,最高达1.45×10~6copies/ml;hbvdna阳性持续时间不等,最短持续4周后于接种第16周消失,持续时间最长者可达到第36周。随着感染时间延长,病毒滴度呈下降趋势。(3)动物肝组织hbvdna的检测:分别于第20周龄和32周龄各进行1次肝活检术取肝组织,检测肝组织hbvdna病毒载量。结果显示,高滴度组两次检测的肝组织总hbvdna阳性率均大于中滴度组,第20周龄高滴度组的hbvdna阳性率(6只,37.5%)与中滴度组(1只,6.25%)比较,两者阳性率差异没有统计学意义(χ~2=2.926,p=0.083);第32周龄检测中,高滴度组的hbvdna阳性率(9只,56.25%)大于中滴度组(2只,12.5%),两组阳性率差异具有显著性(χ~2=4.987,p=0.026)。(4)动物肝组织hbsag及hbcag表达及病理组织学改变:高滴度组肝组织中hbsag及hbcag阳性率分别为62.5%和56.3%;中滴度组hbsag及hbcag的阳性率分别为43.7%和37.5%,与对照组比较差异均具有统计学意义(p<0.05),而两组之间的比较差异无显著性(p>0.05);肝组织病理学改变主要是肝细胞浊肿,偶见单核细胞浸润改变及轻度纤维样变,病变轻微。第二部分IL-10及IL-18表达情况:在第一部分实验中,高滴度组动物感染效率高于中滴度组,且HBV感染时间明显长于中滴度组,因此进一步研究高滴度组动物体内IL-10及IL-18的动态变化情况。11只HBsAg和/或HBV DNA阳性动物与6只对照组的IL-10、IL-18水平比较:(1)ELISA检测血清中这两个因子的动态变化情况:IL-18在第8、12、16、20、24周外周血检测浓度均高于对照组,两者比较差异具有显著统计学意义(P<0.05);IL-10在第8、12、16、20、24周外周血检测浓度均高于对照组,且在第16、20、24周与对照组的比较,差异显著(P<0.05)。(2)q RT-PCR法检测肝组织中这两个因子的mRNA变化情况:感染组IL-10及IL-18 mRNA在肝组织中的表达水平均高于对照组,IL-10 mRNA升高具有显著统计学意义(P<0.05),而IL-18 mRNA的表达量虽升高,但差异无显著性(P>0.05)。(3)免疫组化结果:感染组肝组织中IL-10蛋白表达阳性率为81.8%,与对照组(16.6%)比较,差异具有显著统计学意义(P<0.05);感染组IL-18蛋白阳性率为72.7%,与对照组(16.6%)比较,差异具有显著统计学意义(P≤0.05)。结论:1.选择10~7~10~8copies/ml HBV血清更利于人HBV在新生树鼩体内感染复制,且感染时间较接种10~4~10~6copies/ml浓度的血清更长,提高其HBsAg阳性率或许更利于优化树鼩乙肝慢性感染模型。2.新生树鼩接种HBV后,血清及肝组织内IL-10及IL-18水平均较正常树鼩升高,说明新生树鼩感染人HBV后体内的适应性免疫应答被激活,IL-10及IL-18参与清除HBV并对病毒感染进程有重要影响。