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实验目的:目前关于肌肽抗氧化活性的机制研究主要集中在它清除自由基,与醛类物质反应等方面。本实验以拘束负荷造成小鼠氧化应激模型,模拟人类最常遭遇的心理应激导致的机体氧化应激状态,从调节线粒体自由基产生的角度考察了肌肽对机体氧化应激状态的改善作用,旨在更进一步揭示肌肽抗的抗氧化作用机制。实验方法:18 h拘束负荷后诱发小鼠氧化应激模型,实验动物随机分为正常对照组、拘束应激组、维生素C组(200 mg-kg-1)以及肌肽低剂量组(100 mg·kg-1)和高剂量组(200 mg·kg-1)共5组,每组7只小鼠。实验首先通过检测拘束负荷小鼠血浆谷丙转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)水平来确定造模成功。进一步检测肝组织丙二醛(malondialdehyde, MDA)和抗氧化能力(oxygen radical absorbance capacity, ORAC)水平。同时,我们还测定了抗氧化防御系统的关键酶超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-PX)的活性以及抗氧化小分子活性物质谷胱甘肽(glutathione, GSH)的含量。由于自由基主要产生于线粒体,因此我们从线粒体功能角度探究肌肽的抗氧化应激机制:采用紫外分光光度法测定肝组织线粒体呼吸链复合酶活性、FOF1-ATP合成酶的活性,利用反转录聚合酶链式反应法(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)检测肝脏琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase, SDH) SDHA-SDHD mRNA表达的变化。采用流式细胞术检测肝线粒体膜电位水平,用荧光酶标仪测定活性氧(reactive oxygen species, ROS)的产生速率,用反相-高效液相色谱(reversed phase high-performance liquid chromatography, RP-HPLC)测定三磷腺苷(adenosine triphosphate, ATP)和二磷酸腺苷(adenosine diphosphate, ADP)含量。实验结果:拘束18 h后,小鼠血浆ALT水平显著升高,结果提示拘束负荷可以造成严重的机体氧化应激状态,同时诱发肝损伤。同时我们还观察到肝组织内的MDA水平升高、ORAC旨数下降。给肌肽可以明显降低拘束负荷诱发小鼠血浆ALT活性升高,降低肝组织过高的MDA,恢复肝组织GSH水平,升高抗氧化酶SOD和GSH-PX的活性。在线粒体水平,肌肽通过抑制ROS的产生,清除体内过量的活性氧自由基,改善拘束负荷小鼠肝脏线粒体呼吸链复合酶活性及其相关基因的表达,并改善线粒体膜电位,恢复F0F1-ATP合成酶活性,使能量物质ATP、ADP含量得到显著回升,保护了线粒体能量代谢系统的稳态。实验结论:肌肽能够有效改善拘束负荷诱发的机体氧化应激状态,其作用机制可能与其清除过量自由基、维持体内抗氧化系统的平衡有关。此外,通过缓解机体应激状态,提高线粒体呼吸链复合酶活性,恢复FOF1-ATP合成酶活性,平衡线粒体能量代谢稳态等重要方面调节线粒体功能,从而有效抑制自由基的过度产生也可能是肌肽的体内抗氧化活性的重要机制。