目的：肌萎缩侧索硬化（Amyotrophic lateral sclerosis,ALS）是一种同时累及上、下运动神经元，及其支配的躯干、四肢和头面部肌肉的慢性进行性变性疾病。临床上常表现为上、下运动神经元合并受损的混合性瘫痪。该病自发现以来已有100多年的历史，虽经大量研究，其发病机理仍不清楚，仍无有效的治疗方法，病人的生活质量差，平均存活期短，仅有3-5年。目前关于ALS发病机制的假说有很多，比如兴奋性氨基酸毒性、氧化应激、免疫学机制、线粒体功能障碍和异常蛋白的聚集等。然而，选择性运动神经元丢失的根本原因依然不详，目前仍无特效治疗方法。SIRT1（sirtuins）又名长寿蛋白，最早发现于酵母菌中，是一类从细菌到人类都高度保守的NAD+依赖的去乙酰化蛋白酶类，它分七个亚型，分别为SIRT1-SIRT7,研究最多的是SIRT1，它与酵母菌的SIR2基因的同源性最高，可以使组蛋白去乙酰化，调节许多蛋白酶类的活性，还能从基因水平影响蛋白的表达，参与脂肪代谢、能量限制、免疫功能、炎症反应、自噬、增殖与老化、细胞凋亡、肿瘤等生理功能。近年来，人们对sirtuins在2型糖尿病、癌症、心血管疾病等多种疾病和其相关并发症、遗传性疾病和神经退行性变疾病中的研究日益增多。作为一种保护性蛋白，在朊蛋白病模型的研究中，SIRT1可以通过保护线粒体来维持细胞生存；帕金森病（PD）模型中，SIRT1可以对抗氧化应激损伤；阿尔茨海默病（AD）中，有研究指出SIRT1可以减少β淀粉样蛋白前体（APP）形成，减少β淀粉样蛋白沉积。白藜芦醇（Resveratrol，Res）是多酚类化合物，已被证实可以激活SIRT1并且广泛用于各种实验中，是近来研究较多的SIRT1的激动剂，它主要来源于蓼科植物的根茎中。白藜芦醇具有抗炎、抗癌、抗氧化、抗心血管疾病等作用，近来对于白藜芦醇在神经退行性疾病中有益作用的研究日益增多。然而，在同样作为神经变性疾病的ALS中，SIRT1的表达有无变化，有学者证实SIRT1在ALS中表达是增多的，但也有学者证实SIRT1是减少的，目前其在ALS中的作用及表达变化还未有定论，我们所感兴趣和要研究的是随着疾病的进展，SIRT1在ALS小鼠运动皮层与腰髓中会有怎样的动态变化以及给予白藜芦醇后对SIRT1的表达量会产生怎样的影响。SOD1-G93A转基因小鼠是目前研究ALS较为理想的动物模型之一，本实验旨在观察随着疾病的进展，SOD1-G93A转基因小鼠运动皮层及腰髓中SIRT1的动态变化，同时给予SIRT1激活剂白藜芦醇后SOD1-G93A转基因小鼠运动皮层与腰髓中SIRT1的变化，来进一步加深对ALS的研究，探讨SIRT1成为ALS的治疗靶点是否具有可行性和白藜芦醇在ALS中的作用。方法：选取SOD1-G93A转基因小鼠为实验组，根据病程分为症状前期（60天）组、症状早期（Onset）组、终末期(End)组，选取90天的野生型小鼠作为对照组，各组3只；白藜芦醇（Sigma，101237259）0.375g，溶于7.5ml无水乙醇中，加生理盐水定容至50ml,配成7.5mg/ml的溶液，同时配制15%的乙醇生理盐水溶液作为溶剂；处理组分3组，选取70dSOD1-G93A转基因小鼠，分为空白组、溶剂组、白藜芦醇组，每组根据给药时间分2个亚组，每组6只，从70d（症状前期）开始分别给予上述白藜芦醇溶液30mg/kg/d胃内灌注（白藜芦醇组）、同等体积的溶剂胃内灌注（溶剂组）、不给予任何处理（空白组），分别连续灌注至症状早期（连续给药20-30天）、终末期（连续给药50-60天）后取材，以10%水合氯醛(350mg/Kg体重)腹腔注射麻醉，处死小鼠，取运动皮层与腰髓迅速投入液氮冷冻，之后保存于-80℃冰箱；4%多聚甲醛经心脏灌注，之后剥离小鼠运动皮层与腰髓，用4%多聚甲醛浸泡或用2.5%戊二醛固定组织，利用Western blot技术和免疫组织化学技术观察SOD1-G93A转基因小鼠运动皮层与腰髓中SIRT1的动态表达情况及给予白藜芦醇后SOD1-G93A转基因小鼠运动皮层及腰髓中SIRT1的变化。并利用spss13.0对数据进行分析。结果：1SOD1-G93A转基因小鼠运动皮层与腰髓中随疾病发展SIRT1的动态变化：Wstern blot技术检测SOD1-G93A转基因小鼠运动皮层与腰髓SIRT1表达结果显示，与对照组相比，60d组SIRT1表达量无明显变化，症状早期及终末期组SIRT1表达量均增加。免疫组织化学染色可见症状早期组、终末期组SIRT1表达增加，终末期腰髓中运动神经元明显减少。2给予白藜芦醇后SOD1-G93A转基因小鼠运动皮层与腰髓中SIRT1的表达量变化：Wstern blot示给予白藜芦醇后，症状早期运动皮层及腰髓中白藜芦醇组SIRT1表达量较溶剂组降低，较空白组无明显变化；症状早期溶剂组SIRT1表达量较空白组增多。终末期各组之间SIRT1表达量均无明显变化。免疫组织化学染色显示症状早期SOD1-G93A转基因小鼠运动皮层与腰髓中白藜芦醇组较溶剂组SIRT1表达减少；白藜芦醇组SIRT1表达较空白组有所增加，但无明显变化；溶剂组较空白组SIRT1表达明显增加。终末期三组间SIRT1表达无明显差异。结论：随着疾病的进展，SOD1-G93A转基因小鼠运动皮层与腰髓中SIRT1的表达量逐渐增加，而当症状早期给予白藜芦醇后，SIRT1的表达量较空白组无明显变化，较溶剂组减少，而给予溶剂组SIRT1表达量较白藜芦醇组及空白组均有明显增高，终末期各组之间均无明显变化，这说明白藜芦醇没有起到激活SIRT1的作用，甚至起到了降低SRT1的作用，白藜芦醇对于ALS未起到预期的保护效应，其在ALS模型中的保护作用有限，白藜芦醇的作用机制尚不能定论，需进一步深入研究，同时对ALS的研究起到一定参考作用。