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食管癌是世界上十种常见的恶性肿瘤之一,发病率和死亡率都很高。在我国食管癌死亡率居恶性肿瘤第四位,其发病机制尚不完全明了。核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-kB),是一种重要的转录调节因子,NF-κB家族由Rel蛋白家族中的成员以同源或异源二聚体的形式存在,其中发挥主要生理功能的是p50与p65组成的异源二聚体,p50是与DNA结合的部位,p65参与基因转录的起始调节,并促进p50与DNA结合。研究表明,核转录因子NF-κB信号通路与肿瘤的发生发展有着密切联系,有可能成为肿瘤治疗新的靶点。己酮可可碱(pentoxifylline,PTX),甲基黄嘌呤衍生物,是一种非选择性磷酸二酯酶抑制剂,可以抑制IκBα的磷酸化及其降解,从而下调NF-κB的活性,并且可以抑制NF-κB调控的下游靶基因的表达,进而抑制肿瘤细胞的增殖。
本实验在体外实验的基础上首先构建人食管癌EC9706细胞裸鼠移植瘤模型:将对照组、PTX处理组、5-Fu处理组、PTX与5-Fu联合处理组处理72h后的EC9706细胞分别注入各组裸鼠体内,通过观察肿瘤生长情况以及测量肿瘤体积,从而了解各处理组对裸鼠食管癌移植瘤生长的影响。在此基础上,获取瘤组织,采用免疫组化SP法检测NF-κBp65、COX-2、VEGF和ki67蛋白的表达情况；采用原位杂交技术检测NF-κBp65 mRNA的表达情况,探讨PTX影响食管癌裸鼠移植瘤生长的机制,为临床使用PTX治疗食管癌提供理论依据。方法:
1.各处理组作用EC9706细胞72h后,收集肿瘤细胞,调整细胞悬液浓度至4×107/ml,与裸鼠左腋下注射细胞悬液0.1ml,建立人食管癌裸鼠皮下移植瘤动物模型。
2.观察各组肿瘤生长情况,测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线。
3.采用免疫组化SP法检测NF-κBp65、COX-2、VEGF和ki67蛋白的表达,运用原位杂交技术检测NF-κBp65mRNA的表达。
4.统计学处理:所有数据均经SPSS13.0软件进行统计分析。计量资料采用t检验或方差分析,检验水准伍α=05。
结果：
1.各处理组对人食管癌EC9706细胞裸鼠移植瘤的生长均有影响,空白对照组瘤体体积为2008.00±105.11 mm3；PTX处理组瘤体体积为1599.60±186.32mm3；5-Fu处理组瘤体体积为1280.20±473.18 mm3；PTX+5-Fu联合处理组瘤体体积为589.20±151.45 mm3,组与组之间比较,差异均具有统计学意义(P<0.05)。
2.绘制肿瘤生长曲线,PTX处理组、5-Fu处理组、PTX+5-Fu联合处理组裸鼠移植瘤生长均比空白对照组生长缓慢。
3.NF-κBp65蛋白在空白对照组、PTX处理组、5-Fu处理组、PTX+5-Fu联合处理组的阳性表达:46.80±3.11、36.60±3.65、26.40±3.44、19.60±1.82,组与组之间比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。
4.NF-κBp65mRNA在空白对照组、PTX处理组、5-Fu处理组、PTX+5-Fu联合处理组中的阳性表达:39.20±5.17、31.40±2.70、26.00±3.16、20.40±2.88,组与组之间比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。
5.COX-2蛋白在空白对照组、PTX处理组、5-Fu处理组、PTX+5-Fu联合处理组的阳性表达:37.00±5.70、25.00±2.83、24.60±2.70、16.40±3.65。组与组比较,PTX处理组与5-Fu处理组对比,差异无统计学意义(P>0.05)；其余各组相互比较,差异均具有统计学意义(P<0.01)。
6.VEGF蛋白在空白对照组、PTX处理组、5-Fu处理组、PTX+5-Fu联合处理组的阳性表达:44.04±2.12、43.84±2.28、43.54±2.65、41.94±1.11,组与组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。
7.ki67蛋白在空白对照组、PTX处理组、5-Fu处理组、PTX+5-Fu联合处理组的阳性表达:77.20±4.78、63.36±9.56、39.44±6.60、27.56±6.44,组与组之间比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。
结论：
1.PTX单独应用、PTX与5-Fu联合应用均能够抑制人食管癌EC9706细胞裸鼠移植瘤的生长。PTX与5-Fu联合应用对裸鼠移植瘤的抑制效果比单独应用5-Fu明显。
2.PTX下调NF-κBp65mRNA及其蛋白的表达；PTX下调COX-2、Ki67蛋白的表达；PTX对VEGF蛋白的表达无显著影响。PTX可能通过抑制NF-κB活性及其下游基因的表达从而抑制肿瘤细胞的增殖。
3.PTX可能增强人食管癌EC9706细胞对5-Fu的化疗敏感性,提高化疗效果。