油菜素内酯介导连翘异型花柱发育分子机制的研究

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连翘(Forsythia suspense(Thunb.)Vahl)是花柱二态的异型花柱植物,具自交不亲和性,同种花柱型植株间杂交结实率低。本研究通过BR检测、q RT-PCR与转录组测序分析,着重对BR与连翘异型花柱关系进行研究。首先对连翘异型花柱发育过程中的细胞学差异进行了表征,发现花柱细胞的伸长是异型的主要原因,同时两者的BR含量也存在着差异,其原因可能是BR代谢通路中的基因表达存在差异。通过转录组发现BR在长短花柱中的差异导致连翘TCH4基因表达量发生变化进而使得花柱异型,并且筛选出两个参与调控BR代谢的连翘BR代谢关键基因FsCYP749A22-like1和FsCYP90D1,与连翘异型花柱发育有关。对BR代谢关键基因进行了克隆与理化分析。具体结果如下:1.连翘为实心花柱,鳞片脱落期至露冠期长花柱植株花柱显著伸长,短花柱无显著变化。且长花柱细胞长度显著长于同期短花柱细胞长度,说明花柱细胞的显著伸长是长、短花柱产生差异变化主要原因。鳞片脱落期,现蕾期,露冠期为连翘花柱伸长关键期。2.长花柱中栗甾酮(Castasterone)含量显著高于短花柱,与连翘异型花柱产生有关。使用抑制剂丙环唑外施连翘花芽时,发现长花柱以浓度依赖的方式显著变短,细胞学水平分析发现处理后的细胞长度下降,以此也快速获得了连翘非转基因长花柱变短的表型。3.关于BR含量差异产生原因,有参转录组分析发现,连翘CYP749A22-like1可能通过降解BR影响花柱长度,BR合成基因CYP90D1表达量长花柱高于短花柱,长花柱花芽经PPZ处理后BR合成基因CYP90D1表达量下降,两者的表达量呈反比例关系,将以上两个基因定义为BR代谢关键基因。BR诱导表达的TCH4基因(控制细胞伸长),在外施PPZ的长花柱中表达量降低,而在自然条件下,长花柱中的表达量比短花柱中的高,因此说明BR含量的差异是异型花柱的产生的原因之一。4.克隆得到一个具有完整CDS序列的连翘FsCYP90D1基因,其大小为1571 bp,编码452个氨基酸。FsCYP90D1蛋白是稳定性好的疏水蛋白。并且该蛋白与木犀科油橄榄的CYP90D1的亲缘关系最为接近,验证了转录组注释结果的准确性。
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