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目的: 结直肠癌是最常见恶性肿瘤之一，在全世界范围内发病率较高，且相关死亡率占所有肿瘤第四位，结直肠癌发病率在发展中国家仍有上升趋势，严重影响人类健康，目前研究表明其发生与环境、饮食习惯、遗传及表观遗传变化等有关。现有研究显示线粒体基因组不稳定性与结肠癌发生有关。人类线粒体DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)是一条长约16569bp的双链闭环分子，是细胞内唯一存在的核外遗传物质，包含37个基因，其中包括2个rRNA基因和22个tRNA基因，主要参与线粒体内蛋白质的合成。D-Loop区是mtDNA分子复制和转录的调控中心，包含mtDNA的复制起始位点和转录启动子。目前已有研究表明线粒体DNA D-Loop区的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)与多种肿瘤发病风险相关。本研究中我们通过对150例结肠癌患者及159例正常人mtDNA D-Loop区的SNPs进行对比分析，以期揭示其与结肠癌发病风险的关系。 方法: 1、研究对象:结肠癌组患者为2006年1月～2008年12月间，在河北医科大学第四医院外二科住院的手术患者，术前经内镜检查、组织病理确诊为结肠癌，并行结肠癌根治手术。结肠癌组150例抗凝静脉血标本，均取自结肠癌患者术前静脉血样;对照组159例抗凝静脉血标本，均来自2013年10月～2014年10月间，在河北医科大学第四医院体检的正常人，详细记录体检资料，并除外相关疾病，取静脉血样3ml。所有标本均经过河北医科大学第四医院伦理委员会批准。 2、线粒体DNA提取:用DNA纯化试剂盒(Promega，Madison，WI，USA)提取结肠癌组及正常对照组静脉血标本的线粒体DNA，DNA经鉴定合格后置于4℃恒温冰箱中保存备用。 3、线粒体DNA扩增及测序:采用PCR技术获取目的DNA片段，序列5-CCCCATGCTTACAAGCAAGT-3作为上游引物，序列5-GCTTTGA GGAGGTAAGCTAC-3作为下游引物，用PCR预混试剂盒进行扩增，PCR产物利用琼脂糖凝胶电泳方法证实后，进行DNA产物测序，采用ABIPRISM④BigDye Terminator v3.1循环测序试剂盒，测序时应用ABIPRISM@3100测序仪。每一个标本测序均采用双向重复的方式。 4、统计分析:计量资料采用u检验进行比较，计数资料采用x2检验进行比较。所有数据均采用SPSS19.0(SPSS Inc.，Chicago，IL，USA)统计软件进行统计分析，P＜0.05被认为有统计学意义。 结果: 1、对结肠癌组与正常对照组临床资料进行分析，性别、年龄无差异，均衡可比（P＞0.05）。 2、在正常对照及结肠癌组中，共检测到138个多态变异位点，多态率为14.1％。两组中高频率(＞5％)的单核苷酸多态性变异数共24个，用以分析与肿瘤发病风险的关系。 3、对结肠癌组与正常对照组mtDNA D-Loop区的SNPs分布频率进行分析，共发现7个多态性变异位点(73A/G,146T/C，195T/C，309C/C insert，324C/G,16261C/T,16304T/C)与结肠癌发病风险有关。在73位点，G基因型在结肠癌组分布频率为92.7％，正常对照组分布频率为56.0％，结肠癌组明显高于正常对照组（P=0.000）。146位点，T基因型在结肠癌组分布频率为92.0％，而正常对照组为84.3％，结肠癌组高于对照组(P=0.037)。195位点，T基因型在结肠癌组分布频率为97.3％，而正常对照组为91.2％，结肠癌组高于对照组（P=0.021）。在309位点，结肠癌组中47.3％患者存在1个或2个碱基C插入，对照组中为63.5％，结肠癌组低于正常对照组(P=0.004)。324位点，C基因型分布频率为100％，正常对照组为95.0％，结肠癌组高于对照组（P=0.005）。另外，16261C基因型在结肠癌组分布频率为99.3％，高于正常对照组的91.8％(P=0.002)。16304T基因型在结肠癌组分布频率为95.3％，高于正常对照组的85.5％（P=0.004）。 4、将与结肠癌发病风险相关的高频率SNPs和患者临床特征进行比较分析，结果显示分布频率与临床特征（性别、年龄、肿瘤分期及肿瘤长径）无关（P＞0.05）。 结论: 1、结肠癌患者mtDNA的D-Loop区是一个具有高度多态性的区域，SNPs以单碱基置换、插入为主，主要分布于第1高变区(HV1)和第2高变区(HV2)。 2、mtDNA D-Loop区的SNPs与结肠癌发病风险有关，携带73G、146T、195T、309C、324C、16261C和16304T基因型的个体更易患结肠癌。 3、D-Loop区的多态性改变有望成为评估结肠癌发病风险非常有价值的指标。