浓缩生长因子中活性因子的分布及含量研究

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目的:1.通过研究浓缩生长因子(concentrated growth factors,CGF)中免疫调节因子在各层的分布及含量,检测并探究CGF凝胶内生长因子体外缓释规律,为CGF具有促进组织再生及免疫调节效应提供理论依据并指导临床应用。2.通过对比炎症期即刻种植中是否应用CGF其唇侧水平骨吸收量及术后疼痛评分的区别,探究CGF对炎症期即刻种植的有利影响,以期为CGF在口腔种植中的临床应用提供参考。方法:1.基础实验:招募健康志愿者12名(男女各6人),抽取静脉血制备CGF样品。将CGF样本分为两部分,一部分将CGF凝胶层沿其长轴切取约1/4体积大小,用质量分数为10%的福尔马林溶液固定,乙醇梯度脱水,石蜡包埋,切片后进行HE染色,对其显微结构进行组织学观察以明确其结构特点。另一部分CGF样本通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测上清层、CGF凝胶层、红细胞(red blood cells,RBC)层与正常血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-6(IL-6)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的质量浓度,比较各层差异;将第一部分样本中剩余CGF凝胶每24小时的析出液收集并转移至-80℃冰箱冷藏,连续7天,采用ELISA检测析出液中转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)与骨形态发生蛋白-2(BMP-2)的释放规律。2.临床试验:选取48例美学区牙周炎、根尖周炎行即刻种植的患者共51颗患牙,观察组24例25颗患牙即刻种植同期采用CGF联合Bio-oss骨替代材料引导骨再生(GBR);对照组24例26颗患牙GBR仅单独应用Bio-oss骨替代材料。术后6个月完成永久修复。于即刻种植当天(T1)、术后3个月(T2)、6个月(T3)分别测量种植体肩台下方0mm、4mm、8mm唇侧骨厚度,并采用疼痛视觉模拟评分(VAS)评价术后1周内患者疼痛程度,比较两组差异及种植体唇侧水平骨吸收量。结果:1.HE染色显示:CGF凝胶的纤维蛋白网从上至下由疏松变密集,下部网格中可见少数白细胞嵌入,底部与红细胞层交界区域观察到蓝染的白细胞核聚集成簇;ELISA结果显示,上清层、CGF凝胶层、RBC层及正常血清中均检测到IL-1β、IL-4、IL-6、TNF-α,上清层与CGF凝胶层中各免疫调节因子的浓度分别为:IL-1β[(5.87±1.64 vs 5.78±1.67)pg/ml]、IL-4[(32.35±2.94 vs 31.67±4.16)pg/ml]、IL-6[(6.11±1.52 vs 5.93±1.41)pg/ml]、TNF-α[(49.21±5.43 vs 47.0±7.19)pg/ml],差异无统计学意义,但均显著高于RBC层[IL-1β:(3.34±1.39)pg/ml、IL-4:(26.87±3.73)pg/ml、IL-6:(2.0±0.92)pg/ml、TNF-α:(38.67±8.99)pg/ml]与正常血清[IL-1β:(3.50±1.04)pg/ml、IL-4:(27.09±4.97)pg/ml、IL-6:(2.26±0.94)pg/ml、TNF-α:(38.71±10.52)pg/ml](P<0.05),且RBC层与正常血清中上述因子的质量浓度差异无统计学意义(P>0.05);CGF凝胶中生长因子缓释情况:连续7天的CGF凝胶析出液中,TGF-β1的质量浓度于第3天时达到最高,后持续缓慢释放。PDGF的质量浓度则于第6天时最高,VEGF与BMP-2的质量浓度至第5天达到高峰,之后逐渐减少。2.术后种植体唇侧骨厚度随时间延长而降低,T1至T2时段唇侧水平骨吸收量观察组低于对照组(P<0.05);T2至T3时段两组唇侧水平骨吸收量差异无统计学意义;术后前3天VAS评分观察组优于对照组(P<0.05)。结论:1.CGF凝胶层与上清层中含有大量免疫调节因子,可发挥抗炎功能与免疫调节的作用。2.CGF能释放多种生长因子,可实现生长因子的长效缓释,有利于促进组织再生。3.CGF应用于炎症期即刻种植有利于减少种植体唇侧水平骨吸收,并可减轻术后疼痛,有较好的临床效果。
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