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目的:非酒精性脂肪性肝炎(Non-alcoholic steatohepatitis,NASH)是临床最常见的慢性肝病之一,其发病机理尚未完全阐明。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin,mTOR)是细胞增殖、分化、凋亡以及蛋白合成的重要调节因子。本课题通过建立NASH动物模型,观察mTOR抑制剂雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)对非酒精性脂肪性肝炎的治疗效果,探讨mTOR在非酒精性脂肪性肝炎发病过程中的作用,旨在为非酒精性脂肪肝病的临床治疗提供新的靶点和干预措施。方法:(1)建立动物模型:将20只雌性Wistar大鼠随机分为两组:实验组(RAPA干预)和对照组(NASH模型组),此外,设置空白对照组,即正常组(普通饮食)10只。实验组和对照组给予高脂饲料,正常组喂养普通饲料。饲养6周后,实验组大鼠以1 mg·kg-1·d-1的剂量腹腔注射雷帕霉素,对照组和正常组大鼠腹腔注射相同体积的生理盐水,连续给药4周。收集三组大鼠的血液及肝组织样本。(2)用全自动生化分析仪测定大鼠血清总胆固醇(Total Cholesterol,TC)、谷草转氨酶(Aspartate Aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(Alamine Aminotransferase,ALT)、甘油三酯(Triglyceride,TG)含量。采用苏木精-伊红染色法、马松染色法,在光学显微镜下观察各组大鼠的肝组织病理变化。利用免疫荧光染色及荧光显微镜下观察来比较各组大鼠肝组织mTOR的表达程度。采用免疫蛋白印迹法检测各组大鼠肝脏组织中的mTOR蛋白水平。(3)使用SPSS 23.0统计学软件处理数据,数据用均数±标准差(x±s)表示,单因素方差分析(one-way ANOVA)用于多组间比较,两组之间的比较用LSD检验,p<0.05为差异有统计学显著性。结果:(1)实验组大鼠血清中TC、TG、AST和ALT含量明显低于对照组(p<0.05),实验组大鼠血清中TC、TG、AST和ALT含量明显高于正常组(p<0.05),对照组与正常组相比,大鼠血清中TC、TG、AST和ALT含量显著增加(p<0.05)。(2)肝组织苏木精-伊红染色法染色。实验组表现为肝小叶结构改变,存在肝细胞脂肪变性,肝细胞少数坏死,但是病变较模型组减轻。对照组脂肪肝组织,肝小叶结构紊乱,广泛的肝细胞脂肪变性、气球样变和肝细胞坏死。NAS评分>4分,NASH模型成功建立。正常组显示肝脏组织内肝小叶结构完整清晰,肝板整齐,未见细胞坏死。(3)各组大鼠马松染色比较。实验组大鼠肝小叶结构改变,部分肝细胞在胞浆内出现较少的脂肪液泡,存在肝细胞脂肪变性,肝细胞少数坏死,但是病变较对照组减轻。对照组可见肝小叶结构紊乱,小叶结构部分消失,大部分肝细胞质内出现不同大小的脂肪空泡,细胞之间的界限是模糊的,有广泛的肝细胞脂肪变性、气球样变和肝细胞坏死。同时马松染色可见窦周纤维化或门静周围纤维化。正常组大鼠肝组织马松染色未见明显异常,未见纤维结缔组织沉积。(4)肝组织免疫荧光染色。实验组可见脂肪溶解后形成的空泡,未见mTOR蛋白表达;对照组肝组织内可见大量脂肪空泡,mTOR表达,荧光强度较强;正常组未见mTOR蛋白表达。(5)免疫蛋白印迹结果示对照组大鼠肝组织内mTOR含量最多,实验组次之,正常组最少。实验组mTOR蛋白水平明显低于对照组(p<0.05),对照组mTOR蛋白水平明显高于正常组(p<0.05)。结论:(1)高脂饮食可诱导非酒精性脂肪性肝炎,雷帕霉素可减少mTOR在肝组织中的表达,减轻肝细胞脂肪变性和炎症损伤。(2)mTOR表达与非酒精性脂肪性肝炎的进展密切相关。