【摘 要】
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水稻P5CS的cDNA基因全长2151bp,编码717个氨基酸的开放阅读框架.根据已发表的水稻P5CS的cDNA序列,研究者设计了一对特异性引物.提取14天水稻苗的总RNA,然后进行反 转录,得到c
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水稻P5CS的cDNA基因全长2151bp,编码717个氨基酸的开放阅读框架.根据已发表的水稻P5CS的cDNA序列,研究者设计了一对特异性引物.提取14天水稻苗的总RNA,然后进行反 转录,得到cDNA第一链.以反转录产物为模板,利用特异性引物进行PCR扩增,得到与预期 片段大小一致的约为2.2kb的特异性条带.利用T-A连接策略将这个cDNA基因克隆到载体pBluescript KS中,PCR和酶切验证得到阳性克隆.阳性克隆双酶切后定向克隆到测序质粒pUC19中,荧光自动测序后得到的序列与已发表的序列一致.pUC19的阳性克隆经双酶切后交P5CS 基因定向克隆植物表达载体pROKⅡ中,三亲杂交后,利用农杆菌介导的方法进行烟草的遗传转化.利用PCR方法进行了转基因植株的分子检测.Southern检测和Pro含 量的测定正在进行之中.
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