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多发性骨髓瘤是浆细胞的恶性肿瘤。其特征是骨髓中浆细胞克隆性增殖并积聚,分泌单克隆的免疫球蛋白或其片段(M蛋白),同时伴有广泛的溶骨病变或骨质疏松及贫血、感染、肾功能损害等临床表现。如不进行治疗,进展期MM患者的中位存活期仅为6个月。常规化疗的有效率为40%～60%,完全缓解率低于5%,中位存活期不超过3年。约25%的患者能存活5年以上,存活10年的MM不到5%。因此,探索新的治疗方法提高MM患者的预后,甚至使患者得以彻底治愈是目前急需攻克的课题。人MUC1基因的编码产物Mucin是一种Ⅰ型跨膜蛋白,它通常位于腺上皮细胞的顶表面。研究发现,MUC1在MM等多种肿瘤中异常表达且由于糖基化不全,导致新的抗原肽表位暴露。因此,MUC1是肿瘤主动特异性免疫治疗理想的靶分子。本研究旨在构建MM粘蛋白MUC1-2VNTR(两串联)基因的真核表达载体及该重组体在COS-7细胞中的表达,为研制MM基因疫苗奠定基础。以MUC1-2VNTR的编码基因作为目的基因,在其前端加上KOZAK序列后,两端分别加上HindⅢ和XbaⅠ酶的酶切位点,将人工合成的全基因定向插入pcDNA3.1/myc-his B载体中,转化E.coli感受态细胞获得重组菌株,酶切及测序鉴定为pcDNA3.1-2VNTR/myc-his B重组质粒后,采用L ipofectimine脂质体介导法转染COS-7细胞,用荧光显微镜对荧光表达进行观察,然后用Western blot检测重组体在细胞内外的表达。合成的MUC1-2VNTR基因全长约140bp,所构建的pcDNA3.1-2VNTR/myc-his B重组质粒经过双酶切及测序鉴定后,与预期片段大小相符,并含有完整的阅读框架和目的基因。将其转入COS-7细胞后48小时,用荧光显微镜检测细胞转染。取培养液上清及细胞裂解液,通过Western blot均可检测到Mucin-1蛋白。成功的构建了MM真核表达载体pcDNA3.1-2VNTR/myc-his B,并在COS-7细胞中成功地表达的Mucin-1蛋白。为Mucin-1蛋白的功能研究和MM基因疫苗的研制奠定了实验基础。