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目的:探讨大鼠脂肪干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)的分离、培养及成肌诱导,为成肌细胞尿道括约肌注射治疗压力性尿失禁探索新的种子细胞。
方法:取SD大鼠腹股沟处脂肪,机械剪碎后通过酶消化法分离、培养得到脂肪干细胞。通过对脂肪干细胞相关抗原CD90、CD105和造血干细胞相关抗原CD34的检测,证明其干细胞特性。取培养至第2代,处于对数生长期的细胞进行成肌诱导实验。实验分成诱导组和对照组,分别用诱导培养液和基础培养液进行培养。诱导培养液为含10μmol/L 5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-Aza)、5%FBS(胎牛血清)和5%马血清的DMEM培养液,而对照组所用的基础培养液为只含10%FBS的DMEM培养液。实验期间诱导组和对照组给予相同的处理。诱导时间分为7天、14天、21天、28天和35天,诱导期间通过倒置相差显微镜观察细胞的生长情况和形态变化。诱导结束后通过免疫荧光和流式细胞仪检测成肌细胞特异性抗原结蛋白(Desmin)和肌球蛋白(Myosin)的表达情况,检测诱导结果。
结果:通过酶消化法可以从大鼠腹股沟脂肪中分离、培养出ADSCs。相关的CD分子检测证明其具有干细胞特性。对培养至第2代的ADSCs,使用含10μmol/L 5-Aza的诱导培养液进行成肌诱导培养,28天后细胞整体表现出成肌细胞特有的“漩涡”样生长形态,单个细胞表现出多核化。免疫荧光和流式细胞仪检测结果显示Desmin和Myosin的表达率在诱导28天时达最高分别为52.57%和50.04%,此后延长诱导时间不能进一步提高其表达率。而诱导前和对照组细胞该检测指标均呈阴性表达。
结论:通过酶消化法可以从大鼠腹股沟部脂肪组织中分离、培养出干细胞。用含10μmol/L 5-Aza的诱导培养液可以将脂肪干细胞诱导分化成成肌细胞。诱导4周时成肌细胞特异性抗原呈最高表达率。脂肪干细胞的成肌诱导为成肌细胞注射治疗压力性尿失禁提供了新的细胞来源。