【摘 要】
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目的:膀胱出口梗阻是由各种类型的膀胱颈和/或尿路病变引起的排尿阻力增加,表现为排尿障碍。目前认为BOO是从炎症到纤维化的有序过程,且没有有效的办法可以延缓梗阻所致的膀胱功能障碍。富血小板血浆是血液离心后获得的血小板浓缩物,其含有多种生长因子和细胞因子,广泛应用于再生医学领域。已有研究表明,PRP可通过促进巨噬细胞的M2型转化,从而改善组织炎症,且其具体的机制尚不清楚。本研究拟探讨:不同激活剂活化和
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目的:膀胱出口梗阻是由各种类型的膀胱颈和/或尿路病变引起的排尿阻力增加,表现为排尿障碍。目前认为BOO是从炎症到纤维化的有序过程,且没有有效的办法可以延缓梗阻所致的膀胱功能障碍。富血小板血浆是血液离心后获得的血小板浓缩物,其含有多种生长因子和细胞因子,广泛应用于再生医学领域。已有研究表明,PRP可通过促进巨噬细胞的M2型转化,从而改善组织炎症,且其具体的机制尚不清楚。本研究拟探讨:不同激活剂活化和不同储存时间的富血小板血浆对人单核衍生巨噬细胞表型的影响,以探究诱导巨噬细胞M2极化的最佳富血小板血浆处理条件;最佳处理条件的PRP是否可以改善膀胱出口部分梗阻大鼠的膀胱组织炎症和膀胱功能,及其机制的初步探讨。方法:第一部分:细胞实验。（1）采用自动血液成分分离机采集富血小板血浆,并分别用凝血酶、ADP和Ca Cl2激活。（2）利用密度梯度离心法从人外周血白膜中分离单个核细胞,并用单核细胞阴性分选试剂盒分离单核细胞并用巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）诱导单核细,获得巨噬细胞。（3）不同条件处理PRP与巨噬细胞共培养24 h。（4）流式细胞术检测巨噬细胞CD86、CD163和CD206的表达。（5）ELISA检测不同储存时间的PRP经Ca Cl2活化后,其上清中生长因子的浓度。第二部分:动物实验。通过膀胱颈部分结扎法建立大鼠膀胱出口部分梗阻模型;2周后进行尿动力学检测评估膀胱功能,肉眼大体观察膀胱标本的形态特征;行HE染色观察膀胱黏膜下层炎症浸润状态,Masson染色观察膀胱黏膜下层纤维化面积,免疫荧光检测膀胱黏膜下层巨噬细胞亚型的数量,ELISA检测膀胱组织中炎症相关因子水平。结果:（1）不同处理条件的PRP处理巨噬细胞后,凝血酶和CaCl2活化PRP上清刺激的巨噬细胞CD86的表达水平均高于PRP组,且Ca Cl2活化PRP上清增加了巨噬细胞CD163的表达。（2）PRP在-80℃储存大于10个月时,其活化上清中生长因子的浓度均高于小于10个月组,但仅FGF和EGF的增加具有显著统计学差异,且储存大于10个月的PRP活化上清与巨噬细胞共培养后CD86、CD163和CD206表达均明显升高。（3）大鼠尿动力学检测结果显示,膀胱出口部分梗阻2周后大鼠的膀胱功能明显异常。而PRP注射治疗后,大鼠的膀胱功能有所改善。（4）HE染色和Masson染色结果显示,梗阻2周后p BOO大鼠的膀胱组织结构重度异常,组织内可见大量感染性炎症细胞浸润。而经PRP治疗的大鼠膀胱组织结构和炎性细胞浸润明显改善。（5）ELISA结果显示,p BOO组大鼠膀胱组织中IL-1β、TNF-α和IL-6的含量增加,且在PRP治疗后均有所下降,但仅IL-6含量的变化具有显著统计学差异。（6）免疫荧光结果显示,p BOO组M1型巨噬细胞的数量明显增加,而PRP治疗后,M1型减少且M2明显增加。结论:（1）CaCl2激活PRP可能更好地促进巨噬细胞M2极化。（2）PRP在-80℃长期储存后（＞10个月）,抗炎作用增强,但促炎细胞因子的浓度也会随之增加。（3）本研究首次采用PRP膀胱内注射治疗大鼠p BOO继发膀胱功能异常,结果显示Ca Cl2活化PRP上清可提高p BOO大鼠的排尿效率,且膀胱组织内炎性因子浸润明显减少。（4）PRP的组织修复作可能不仅归因于其中包含的大量生长因子,还取决于其对巨噬细胞极化的调节。
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