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目的：从细胞生物学水平观察肝癌细胞凋亡相关因子在反义端粒酶RNA基因诱导人肝癌细胞株Bel-7402凋亡过程中的变化。初步探讨逆转录病毒介导的反义端粒酶RNA基因诱导肝癌细胞凋亡的分子机制,从而为临床治疗肝癌提供理论依据。方法：本课题组前期实验已通过质粒构建-电穿孔法导入包装细胞-重组病毒感染肝癌细胞株三个步骤筛选获得稳定转染目的基因的肝癌细胞克隆。体外培养肝癌细胞株Bel-7402以及分别转染正、反义端粒酶RNA基因组的肝癌细胞Bel-7402-hTR-EcoRI和Bel-7402-hTR-BamHI。利用PCR法检测目的基因的插入；Hochest33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡的形态学变化。采用实时荧光定量PCR法和Western Blot法分别检测凋亡相关基因p53、Bcl-2和Bax mRNA和蛋白的表达情况。结果：1 PCR鉴定可于约500bp处检测到目的基因的表达,证明目的基因在肝癌细胞中持续表达。2反义端粒酶RNA转染后的肝癌细胞,Hochest33258荧光染色发现部分细胞出现染色质浓缩,呈致密亮蓝色荧光,部分细胞出现凋亡特征性改变,染色质分布不均,形成荧光斑点。3实时荧光定量PCR法检测发现反义转染组肝癌细胞的p53mRNA和BaxmRNA表达显著高于正义转染组和空白对照组(P<0.05),Bcl-2mRNA表达则显著低于正义转染组和空白对照组(P<0.05)。正义转染组和空白对照组间各基因表达无明显差异(P>0.05)。4 Western Blot结果显示反义端粒酶RNA使Bel-7402细胞p53、Bax蛋白表达量明显升高(P<0.01),且能明显降低Bcl-2蛋白表达水平(P<0.01)。结论：1应用Hochest 33258荧光染色法能快速观察肝癌Bel-7402细胞凋亡细胞核变化的情况。2反义端粒酶RNA诱导肝癌细胞凋亡的过程中伴随着p53、Bax基因的表达量增加和Bcl-2基因的表达量下降,表明反义端粒酶RNA可能通过上调p53、Bax和下调Bcl-2的表达诱导肝癌细胞凋亡。3端粒酶活性与细胞凋亡调控基因Bcl-2的表达呈正相关,与p53和Bax的表达呈负相关。