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第一部分脂氧素受体激动剂BML-111在大鼠内毒素性急性肺损伤中的保护效应目的建立大鼠内毒素性急性肺损伤模型,探讨脂氧素受体激动剂BML-111对急性肺损伤的保护作用及可能机制。方法40只清洁级雄性SD大鼠,体重在250～350g之间,随机分成4组：空白对照组(C组)、脂多糖组(A组)、BML-111组(B组)和BML-111治疗组(AB组)。C组经腹腔注射PBS,半个小时后尾静脉注入生理盐水；A组经腹腔注射PBS,半个小时后尾静脉注入脂多糖5mg/kg；B组BML-111按1μg/g经腹腔注射,半个小时后尾静脉注入生理盐水；AB组BML-111(1μg/g)腹腔注射,半个小时后尾静脉注入脂多糖5mg/kg。4组大鼠尾静脉注入生理盐水及脂多糖6小时后,颈动脉放血处死。光镜下观察大鼠肺组织的病理学改变,进行急性肺损伤评分；测定肺组织湿干重比值(W/D)；检测支气管肺泡灌洗液中(BALF)的总蛋白浓度；测定肺组织的髓过氧化物酶(MPO)活性、一氧化氮(NO)含量、丙二醛(MDA)浓度和超氧化物歧化酶(SOD)活力；用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA;用凝胶电泳迁移率实验(EMSA)检测大鼠肺组织核转录因子-κB(NF-κB)的活化水平。结果(1)空白对照组和BML-111组肺泡组织结构没有明显改变,脂多糖组和BML-111治疗组均表现为肺泡毛细血管充血,肺泡腔内炎性细胞浸润,肺泡间隔增厚。但BML-111治疗组病理学改变轻于脂多糖组。与空白对照组比较,脂多糖组和BML-111治疗组大鼠肺组织急性肺损伤评分明显升高(均P＜0.05)；而与脂多糖组比较,BML-111治疗组大鼠肺组织急性肺损伤评分明显降低(P＜0.05)。(2)与空白对照组比较,脂多糖组和BML-111治疗组肺组织湿/干重比明显升高(均P＜0.05)；而与脂多糖组比较,BML-111治疗组肺组织湿/干重比明显降低(P＜0.05)。(3)与空白对照组比较,脂多糖组和BML-111治疗组大鼠BALF中的总蛋白浓度明显升高(均P＜0.05)；而与脂多糖组比较,BML-111治疗组大鼠BALF中的总蛋白浓度明显降低(P＜0.05)。(4)与空白对照组比较,脂多糖组和BML-111治疗组大鼠肺组织MPO活性明显升高(均P＜0.05)；而与脂多糖组比较,BML-111治疗组大鼠肺组织MPO活性明显降低(P＜0.05)。(5)与空白对照组比较,脂多糖组和BML-111治疗组大鼠肺组织NO含量明显升高(均P＜0.05)；而与脂多糖组比较,BML-111治疗组大鼠肺组织NO含量明显降低(P＜0.05)。(6)与空白对照组比较,脂多糖组和BML-111治疗组大鼠肺组织MDA的浓度明显升高(均P＜0.05)；而与脂多糖组比较,BML-111治疗组大鼠肺组织MDA浓度明显降低(P＜0.05)。(7)与空白对照组比较,脂多糖组和BML-111治疗组大鼠肺组织SOD活力明显降低(均P＜0.05)；而与脂多糖组比较,BML-111治疗组大鼠肺组织SOD活力明显升高(P＜0.05)。(8)与空白对照组比较,脂多糖组和BML-111治疗组大鼠肺组织的TNF-αmRNA明显升高(均P＜0.05)；而与脂多糖组比较,BML-111治疗组大鼠肺组织的TNF-αmRNA明显降低(P＜0.05)。(9)与空白对照组比较,脂多糖组和BML-111治疗组大鼠肺组织NF-κB活化水平明显升高(均P＜0.05)；而与脂多糖组比较,BML-111治疗组大鼠肺组织NF-κB活化水平明显降低(P＜0.05)。结论脂氧素受体激动剂BML-111对大鼠内毒素性急性肺损伤具有保护效应,其机制可能与抗氧化损伤、减少炎性细胞浸润、抑制NF-κB的活化及TNF-αmRNA的表达有关。第二部分BML-111对内毒素性急性肺损伤大鼠肺泡液体的清除效应及对钠通道α亚型表达(α-ENaC)的影响目的探讨脂氧素受体激动剂BML-111对急性肺损伤大鼠肺泡液体的清除效应以及对钠水主动转运系统中钠通道a亚型表达的影响。方法40只清洁级雄性SD大鼠,体重在250～350g之间,随机分成4组：空白对照组(C组)、脂多糖组(A组)、BML-111组(B组)和BML-111治疗组(AB组)。C组经腹腔注射PBS,半个小时后尾静脉注入生理盐水；A组经腹腔注射PBS,半个小时后尾静脉注入脂多糖5mg/kg；B组BML-111按1μg/g经腹腔注射,半个小时后尾静脉注入生理盐水；AB组BML-111(1μg/g)腹腔注射,半个小时后尾静脉注入脂多糖5mg/kg。4组大鼠尾静脉注入生理盐水及脂多糖6小时后,气管切开进行气管插管,接小动物呼吸机,行容量控制通气。机械通气参数如下：潮气量10ml/kg,呼气末正压3cmH20,呼吸频率40～60次/min,吸入氧浓度100%。分离大鼠一侧颈总动脉,插入动脉导管,接压力换能器,连接监护仪,持续监测大鼠的生命体征,并可经此采集动脉血标本,进行动脉血气分析。机械通气循环稳定30分钟后,进行各项目检测。检测大鼠平均动脉压(MAP)、心率(HR)和血气指标的变化；测定大鼠肺泡液体清除率(AFC),方法如下：按5 ml/kg抽取FITC-Albumin标记的5%牛血清白蛋白灌注液,将灌注液注入大鼠的肺内,连接呼吸机,机械通气持续1h后,腹主动脉横断处死大鼠,完整取出气管、肺和心脏,吸出肺泡液体,用酶标仪读取荧光标记白蛋白的注入前后数值。按公式AFC(％)=[(Cf-Ci)/Cf]×100％,Ci为荧光标记白蛋白注入前数值,Cf为荧光标记白蛋白吸出后数值,计算出肺泡液体清除率(AFC)；观察肺组织病理学改变及急性肺损伤评分测定；用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测肺组织α-ENaC mRNA的表达水平；用免疫印迹分析(Western Blot)法检测肺组织α-ENaC蛋白的表达。结果(1)与空白对照组比较,BML-111组大鼠MAP、HR和血气指标没有显著差异(均P>0.05)；而与空白对照组比较,脂多糖组和BML-111治疗组大鼠的HR、PaCO2明显升高(均P<0.05),MAP、PH和PaO2明显降低(均P＜0.05)；与脂多糖组比较,BML-111治疗组大鼠HR、PaCO2明显降低(均P＜0.05), MAP、PH和PaO2明显升高(均P＜0.05)。(2)与空白对照组比较,脂多糖组和BML-111治疗组大鼠AFC明显降低(均P＜0.05),而BML-111组大鼠AFC明显升高(P＜0.05)；与脂多糖组比较,BML-111治疗组大鼠AFC明显升高(P＜0.05)。(3)空白对照组和BML-111组大鼠肺组织结构完整,肺泡间隔正常,无炎性细胞浸润；脂多糖组大鼠肺组织结构破坏明显,肺组织内大量炎症细胞浸润,肺泡壁明显充血、水肿；BML-111治疗组大鼠肺组织有炎症细胞浸润,肺泡壁充血、水肿程度轻于脂多糖组。与空白对照组比较,BML-111组肺损伤评分没有显著差异(p＞0.05),而脂多糖组和BML-111治疗组大鼠肺组织急性肺损伤评分明显升高(均P＜0.05)；与脂多糖组比较,BML-111治疗组大鼠肺组织急性肺损伤评分明显降低(P＜0.05)。(4)与空白对照组比较,脂多糖组α-ENaC mRNA表达明显降低(P＜0.05),而BML-111组和BML-111治疗组α-ENaC mRNA的表达明显升高(均P＜0.05)；BML-111组和BML-111治疗组α-ENaC mRNA的表达没有显著差异(P>0.05)。(5)与空白对照组比较,脂多糖组α-ENaC蛋白表达明显降低(P＜0.05),而BML-111组和BML-111治疗组α-ENaC蛋白表达明显升高(均P＜0.05)；BML-111组和BML-111治疗组α-ENaC蛋白表达没有显著差异(P＞0.05)。结论脂氧素受体激动剂BML-111能提高大鼠肺泡液体清除率,对内毒素性急性肺损伤具有肺泡液体清除效应,并且其作用可能是通过增强肺水转运系统中α-ENaC的表达实现的。第三部分BML-111对脂多糖诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞环磷酸腺苷(cAMP)和环磷酸鸟苷(cGMP)水平的影响目的研究脂氧素受体激动剂BML-111对脂多糖诱导人肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)cAMP、cGMP水平的影响方法体外培养A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞,随机分成4组：①空白对照组②LPS组：以1μg/ml的脂多糖刺激A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞③BML-111组：用1μg/ml的BML-111处理A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞④BML-111+LPS组：用1μg/ml的脂多糖和1μg/ml的BML-111处理A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞。各组孵育6小时,流式细胞仪检测细胞凋亡情况；逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测α-ENaC mRNA的表达；免疫印迹分析(Western Blot)法检测α-ENaC蛋白的表达；放射免疫分析法测定A549人肺泡Ⅱ型上皮细胞内cANP、cGMP含量。结果(1)与空白对照组比较,LPS组和BML-111+LPS组细胞凋亡明显升高(均P＜0.05)；与LPS组比,BML-111+LPS组细胞凋亡明显降低(P＜0.05)。(2)与空白对照组比较,LPS组α-ENaC mRNA的表达明显降低(P＜0.05),BML-111组和BML-111+LPS组α-ENaC mRNA的表达明显升高(均P＜0.05)。(3)与空白对照组比较,LPS组α-ENaC蛋白表达明显降低(P＜0.05),BML-111组和BML-111+LPS组α-ENaC蛋白表达明显升高(均P＜0.05)。(4)与空白对照组比较,LPS组cAMP水平明显降低(P＜0.05),而BML-111组和BML-111+LPS组cAMP水平明显升高(P＜0.05)。与空白对照组比较,LPS组cGMP水平明显升高(P＜0.05),而BML-111组和BML-111+LPS组cGMP水平明显降低(P＜0.05)。结论脂氧素受体激动剂BML-111能上调肺泡Ⅱ型上皮细胞内cAMP水平和降低细胞内cGMP水平,增强α-ENaC的表达。