论文部分内容阅读
目的通过比较融合生长肝细胞(L02)与肝癌细胞(HCCLM3)对不同硬度基底(0.5kPa、4kPa和玻璃)的响应情况,探查这两类细胞融合生长差异的成因,加深对肿瘤细胞群体生长行为的进一步认识。方法运用实时显微摄影技术、免疫荧光显微观测技术、流式细胞技术及Western Blotting等试验方法分别检测L02细胞与HCCLM3细胞在不同硬度基底上的形态特征、骨架构象、E-cad、paxillin的分布和Integrinβ1的表达,以及Src激酶活性水平的变化。结果不同硬度基底上,L02细胞与HCCLM3细胞的融合生长行为也不同。(1)融合生长L02细胞呈圆形或立方形,HCCLM3细胞呈多角形,铺展和极化较L02细胞更为明显,随基底硬度增加L02细胞圆度随时间变化幅度较小,HCCLM3细胞变化幅度较大;加EDTA后细胞随时间变化而变圆,圆度和铺展面积减小,随基底硬度增加,细胞圆度和铺展面积增大,L02细胞较HCCLM3细胞明显;(2)融合生长的L02细胞皮质下呈现环形骨架,E-cad定位于细胞-细胞连结面,与细胞骨架呈共定位分布,而HCCLM3细胞中的E-cad呈现弥散分布,皮质下的骨架环不完整或者是根本形不成骨架环,胞内细胞骨架沿着基底呈纤维状分布;随基底硬度增加,L02细胞骨架环越来越不明显,HCCLM3细胞应力纤维分布越明显,这两种细胞中paxillin增加,HCCLM3细胞中多于L02细胞,且与骨架不呈共定位分布;(3)不同硬度基底上,E-cad、Integrinβ1和p-Src的表达量也不一样,随基底硬度增加L02细胞和HCCLM3细胞中的E-cad表达量显著下降(P<0.01),而p-Src和Integrinβ1的表达量却显著的增加(P<0.01),且HCCLM3细胞较L02细胞变化更为明显;加EDTA后L02细胞E-cad显著增加,p-Src显著降低,而HCCLM3细胞E-cad和p-Src无显著性变化。结论在二维环境中,(1)细胞的骨架构象调整对E-钙粘素的定位存在一种正相关性;(2)基底硬度的变化对肝癌细胞中钙粘素与整合素分别所介导的粘附系统之间的平衡调节的影响要比肝细胞更为明显。