阿霉素致心肌损伤的内质网应激机制研究

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目的:研究阿霉素作用的H9C2心肌细胞内质网应激标志因子CHOP/GADD153蛋白的表达变化情况,探讨内质网应激在阿霉素心脏毒性的作用,为阐明阿霉素心脏毒性提供新的作用机制。方法:体外培养H9C2心肌细胞株,0.25%胰酶消化收集对数生长期的H9C2心肌细胞进行试验。第一部分为量效检测,分4组:空白对照组和阿霉素处理组(剂量分别为2、5、10umol/l)。其中空白对照组为继续正常培养12小时,阿霉素处理组为分别用终浓度为2、5、10umol/L的阿霉素处理12小时。收集细胞,提取蛋白,采用western blot法检测CHOP蛋白的表达,β-actin为内参。第二部分为时效检测,也分4组:空白对照组和阿霉素处理组(时间分别为6、12和24小时)。其中空白对照组为继续正常培养24小时,阿霉素处理组用终浓度为5umol/L的阿霉素分别处理6、12和24小时。收集细胞,提取蛋白,采用western blot法检测CHOP蛋白的表达,β-actin为内参。两部分实验均以CHOP/β-actin灰度比表示蛋白的相对表达量。统计学处理:采用SPSS PASW Statistics统计软件包分析数据。实验数据以均数±标准差(x±SD)表示,统计方法采用One-way单因素方差分析,两样本的多重比较采用Dumnett-t检验。p<0.05认为有显著性差异。结果:第一部分量效实验显示:与对照组比较,不同浓度(2、5、10umol/l)阿霉素处理组H9C2心肌细胞CHOP蛋白表达均明显增加(p<0.05),其中5umol/l和10umol/l阿霉素处理组CHOP蛋白表达升高最明显。故后续实验均采用5umol/l的阿霉素处理剂量。第二部分时效实验显示:与对照组比较,阿霉素处理不同时间(6、12、24小时)H9C2心肌细胞CHOP蛋白表达明显增加(p<0.05)。且随处理时间的延长,CHOP蛋白表达量递增,阿霉素处理24小时CHOP蛋白表达量最高。结论:1、阿霉素处理H9c2心肌细胞可以引起内质网应激反应,并且该反应在一定范围内呈浓度和时间依赖性;2、内质网应激可能是阿霉素致心肌损伤的一个机制。
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