【摘 要】
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酪蛋白糖巨肽(Casein Glycomacropeptide, CGMP)产生于干酪制作的过程中,它具有非常丰富的生物学活性。本课题以离子交换树脂为分离介质,对适于规模生产CGMP的工艺条件进行优
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酪蛋白糖巨肽(Casein Glycomacropeptide, CGMP)产生于干酪制作的过程中,它具有非常丰富的生物学活性。本课题以离子交换树脂为分离介质,对适于规模生产CGMP的工艺条件进行优化,并将在此条件下制备出的CGMP产品进行抑制流感病毒的相关实验,从而对CGMP能抑制流感病毒这一生物活性加以验证。 本试验在现有酪蛋白糖巨肽分离制备工艺方法的基础上,对离子交换法分离制备酪蛋白糖巨肽规模化制备过程中的五个工艺指标(即上样体积、上样流速、洗脱液浓度、洗脱液体积、树脂使用周期)进行优化,由此建立起的工艺路线为:在对乳清粉溶液用等电点法进行除杂等预处理后,将处理好的乳清粉溶液配制成浓度为0.02g/mL、pH为3.9、体积为树脂体积3倍的样品,以0.8L/min的上样流速泵入交换柱中进行动态吸附,在用缓冲液清洗树脂后用浓度为0.6mol/L的氯化钠溶液对酪蛋白糖巨肽进行洗脱,然后使用超滤膜(6000u)对收集到的洗脱液进行脱盐浓缩,冻干后即可得到CGMP产品。进行此工艺方法生产酪蛋白糖巨肽的树脂使用周期为4次。使用该工艺制备酪蛋白糖巨肽的过程中总共使用的乳清粉溶液体积为108L、树脂36L,制备酪蛋白糖巨肽产品共16.87g,得率为0.781g/100g乳清粉。计算后可得知酪蛋白糖巨肽的纯度为80.35%、回收率为46.77%、唾液酸含量为15.5g/100g蛋白。 在此工艺条件下生产出的CGMP产品可用于对流感病毒的抑制实验,通过对流感病毒的血凝抑制实验表明酪蛋白糖巨肽在抑制流感病毒造成的血凝现象有一定作用,且最低浓度可到1mg/ml。 本课题优化了规模化分离制备CGMP过程中的相关工艺指标,建立起一条较成熟可操作性高且易推广的工艺路线,且由此工艺路线能得到高纯度、高唾液酸含量的CGMP产品,为 CGMP工业化生产以及多领域开发和应用提供一定参考和支持;试验结果还表明CGMP中的唾液酸对甲型H1N1和乙型流感病毒有抑制作用,这为流行性感冒的预防和治疗提供了一定的理论依据,也为新型流感治疗药物的研发提供了新的思路。
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