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研究背景亚临床甲减(subclinical hypothyroidism,SCH)是甲状腺功能减退症(hypothyroidism,简称甲减)的一种类型,其甲状腺功能检查表现为仅有血清促甲状腺激素(Thyroid stimulatinghormone,TSH)水平升高,而总甲状腺素(Total thyroxine,TT4)、游离甲状腺素(Freethyroxine,FT4)水平正常。近年来,SCH患病率逐年升高,成为内分泌领域研究的热点。祖国医药理论在诊疗SCH方面具有独特优势,但目前在中医辨证分型方面尚未达成统一标准,这在一定程度上限制了 SCH中医规范化诊疗方案的形成。微小RNA(microRNA,简写为miRNA)被证实在多种生物学过程中发挥重要调控作用,且具有特异性及时空性,与中医学证候概念存在相通性,并可能参与证侯的发生和动态演变,目前miRNA在多种疾病中医证候阐述中均得到一定应用,而就笔者所知,尚无SCH及其中医证候相关的miRNA研究。本课题组前期研究显示,SCH患者的中医证候以脾肾气虚证、肝阴不足证、肝气郁结证三大证型为主。因此,寻找SCH及中医证候相关miRNA有助于进一步揭示SCH不同证候形成的微观机制,从而为中医规范化辨证分型提供客观依据。研究目的本研究通过对60例SCH患者的调查问卷进行分析,初步探讨SCH的中医证侯学特征,并利用miRNA高通量测序技术,对SCH的3个不同证型以及正常对照人群的miRNA表达情况进行检测,筛选差异miRNA表达谱,并对差异miRNA进行靶基因预测、GO分析,试图阐述SCH不同证候形成过程中参与的miRNA及其生物学功能。研究方法1 60例SCH患者中医证侯学特征:根据纳排标准,筛选2018年03月-2019年03月在3家中心内分泌科门诊就诊的SCH患者,填写“中医证候及体质特征调查表”,采集患者一般信息、病史特征、临床症状、实验室检查、中医体质等,建立数据库,运用SPSS24.0软件进行统计分析,对SCH的中医证候特征进行初步探讨。2 SCH不同证型间差异表达miRNA研究:选取我院就诊的SCH患者,根据入组时中医辨证分型结果随机选取脾肾气虚、肝气郁结、肝阴不足证各3例;同时选取对照组3例。留取受试者入组时静脉血血浆,进行RNA提取及高通量测序,获取SCH与正常人群间差异miRNA表达谱,预测靶基因,并分析差异miRNA可能参与的生物学过程。研究结果1SCH患者中医主证分布:60例SCH患者中医主证分布情况为脾肾气虚证最多,其次为肝阴不足证、肝气郁结证及其他证侯。SCH各证型在性别、不同年龄段中的分布差异无统计学意义。SCH中医证型的分布与病程长短有一定关系,病程小于6月者主证以肝气郁结及其他证侯为主,随病程延长脾肾气虚证逐渐增多。2中医证型与理化指标的相关性:中医证型与理化指标的相关性分析表明,TSH值在不同证型之间存在差异,可作为中医辨证分型的一个依据。血清FT3、FT4、TT3、TT4、anti-TPO、anti-TG、血脂水平与中医证型无显著相关性。3 SCH患者中医体质分布:60例SCH患者的体质调查中单一体质仅占18.3%,81.7%的患者体质为2种及2种以上复合体质。就单种体质在SCH患者中的占比来说,以气郁质最多,其次为气虚质、阳虚质、阴虚质。4 SCH患者差异表达miRNA研究:SCH组与对照组比较,筛选出显著差异表达miRNA2136条(差异倍数>2即|log2FC|>1且Q值≤.001),其中1233条miRNA表达显著上调,903条miRNA表达显著下调。SCH脾肾气虚组与对照组比较,筛选出差异表达miRNA1585条,其中568条miRNA表达显著上调,1017条miRNA表达显著下调。肝气郁结组与对照组比较,筛选出差异表达miRNA 1534条,其中439条miRNA表达显著上调,1095条miRNA表达显著下调。肝阴不足组与对照组比较,筛选出显著差异表达miRNA 1687条,其中713条miRNA表达显著上调,974条miRNA表达显著下调。5差异表达miRNA的GO分析:GO分析表明,差异miRNA靶基因涉及的生物学过程主要为类视黄醇代谢过程、有机物反应、角化、生物刺激反应、萜类代谢过程、外界生物刺激反应、其他生物学反应、二萜代谢过程等、防御反应、对外部刺激的反应等。研究结论1 60例SCH患者中医证候分布以脾肾气虚证最常见,其次为肝阴不足证、肝气郁结证及其他证侯。各个中医证型的分布与病程长短有一定关系,病程短者其主证以肝气郁结及其他证侯为主,随病程延长脾肾气虚证逐渐增多。2 60例SCH患者各证候与临床生化指标相关性表明,TSH值在不同证型之间存在差异,可作为中医辨证分型的一个参考指标。FT3、FT4、TT3、TT4、anti-TPO、anti-TG及血脂水平与中医证型之间无显著相关性。3 60例SCH患者的体质分布以2种及2种以上复合体质多见。就单种体质在SCH患者中的占比来说,以气郁质最多,其次为气虚质、阳虚质、阴虚质。4 SCH患者脾肾气虚证、肝气郁结证、肝阴不足证与对照组血浆中均存在差异表达miRNA,可能作为SCH诊断的特异性标志物及临床辨证分型的客观依据之一,并有望成为潜在的治疗靶点。