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第一部分1,25-(OH)2D3对大鼠的系膜细胞增殖及凋亡的影响目的:研究1,25-二羟维生素D3(1,25-(OH)2D3)对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法:体外培养肾小球系膜细胞,细胞分为:空白对照组、表皮生长因子(EGF)干预组、1,25-(OH)2D3干预组、EGF加1,25-(OH)2D3联合干预组,分别给予10ng/ml的EGF及0~10-6mol/L的1,25-(OH)2D3的培养液干预系膜细胞,作用24~72小时。1.以噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力,观察不同浓度、不同作用时间1,25-(-H)2D3对系膜细胞增殖的影响;2.倒置相差显微镜动态观察系膜细胞形态及增殖变化;3.流式细胞仪(FCM)检测1,25-(-H)2D3对系膜细胞凋亡及细胞周期的影响;4.Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果:1.0~10-6 mol/L浓度的1,25-(OH)2D3作用于系膜细胞48h均能显著抑制系膜细胞生长及增殖(P<0.01),并呈浓度依赖性;10-8mol/L的1,25-(OH)2D3对系膜细胞生长的抑制作用在一定时间范围内随着时间的延长而增强;2.1,25-(OH)2D3作用系膜细胞72小时后,显微镜下可见系膜细胞皱缩,体积变少,核浓缩呈点状,呈现不同程度的细胞凋亡;3.0-10-6的1,25-(OH)2D3作用系膜细胞72h后,各组G0/G1期细胞含量均较对照组增高,S期含量也随之减少,G2/M期含量无显著变化(P>0.05)。1,25-(OH)2D3干预组可见亚G1凋亡峰。4.EGF干预组细胞数量明显多于其他各组(P<0.05);EGF组G0/G1期细胞显著减少,S期细胞明显增加,G2/M期细胞增加(P<0.05);加入1,25-(OH)2D3和EGF联合干预后,增殖的系膜细胞明显抑制,细胞数量减少,并出现凋亡峰。5.Western blot显示与对照组比较,EGF组PCNA蛋白表达增加,1,25-(OH)2D3组与联合干预组表达均减少,1,25-(OH)2D3组减少最明显。结论:1.0~10-6mol/L浓度的1,25-(OH)2D3能够抑制系膜细胞的生长,其抑制作用呈浓度及时间依赖性。2.1,25-(OH)2D3能够抑制EGF诱导的系膜细胞增殖,诱导增殖细胞凋亡,减少EGF诱导的增殖细胞相关增殖蛋白的表达。