植物重组酶编码基因的克隆和过表达研究

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叶绿体遗传工程拥有良好前景,然而这方面的成果集中在烟草等少数几种植物。同源重组过程是叶绿体基因组转化的限速步骤之一。在提高叶绿体转化中外源基因的整合效率方面,前人鲜有尝试。同时,参与同源重组的关键酶RecA,在植物叶绿体中罕有报道。   本实验使用3种植物(拟南芥、百脉根和烟草),试图通过参与同源重组的重组酶基因的克隆,及其在目的植物中的过表达,提高叶绿体基因组转化技术的效率。   本实验提取了拟南芥总RNA,并通过RT-PCR技术,用特异引物克隆到已知基因AtrecA。并利用它和植物表达载体pPGN构建了适于百脉根浸染的pPGN-AtrecA。随后将其转入农杆菌LBA4404,浸染百脉根子叶。在浸染十余批后,获得了两批出芽的愈伤组织,前一批白化死亡,后一批仍在继续筛选。   本实验提取了百脉根总RNA,并通过RT-PCR技术,试图用特异引物克隆百脉根已知EST序列,但未获成功。   本实验提取了烟草总RNA,并通过RT-PCR技术,用特异引物克隆到烟草已知EST序列,该EST序列推定属于烟草NtrecA基因。利用已验证的这段序列进行3’RACE,克隆到NtrecA3’序列。经序列分析得知,已获得完整的NtrecAORF,该ORF编码完整的RecA主链,并具有推定的线粒体定位信号。
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