DNA指纹技术在猪个体识别和可追溯系统中的应用研究

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健全的食品溯源技术作为食品可追溯的重要手段,越来越受到有关部门和消费者的普遍关注。本研究基于DNA指纹识别技术进行研究,探索微卫星DNA在猪个体识别和溯源应用中的可行性,对家畜屠宰后肉制品的跟踪、追溯具有重要价值。主要研究内容和结果如下:1)借鉴国内外相关研究,设计一对引物检测生鲜猪牛羊的线粒体DNA,能将猪、牛、山羊、绵羊区分开来,而且可以检测25 pg的猪肉DNA,即快速又灵敏,此方法可应用在猪个体鉴定和溯源的检测环节中。2)基于聚丙烯酰胺凝胶电泳PAGE技术和PCR技术,利用14个微卫星标记对3个国外引进猪品种(大白猪Yorkshire,长白猪Landrace和杜洛克猪Duloc)的3对亲本各10个后代进行个体鉴定。结果发现利用7个微卫星标记,可对其中2对亲本的20个后代进行个体识别,利用14个微卫星标记可对另1对亲本的10个后代进行个体识别。利用这些微卫星标记对50头猪进行从猪肉样到猪血液样品的溯源研究,结果表明同一头猪的肉样和血液DNA的微卫星座位是一一对应的,说明从猪肉溯源到其对应的猪血液样品是可行的。3)鉴于国外的研究,从NCBI数据库中筛选出90个微卫星标记,它们的扩增片段长度较大。并且通过优化PCR反应条件实验,发现利用Touchdown-PCR技术,以及反应体系中添加15%甘油,能减少微卫星扩增的非特异性,在这个基础上,进一步筛选出42个微卫星标记。利用其中3个微卫星标记对80个巴马(Bama)小型猪进行个体识别,识别率达72.5%,再添加2个微卫星标记能得到更好的结果,识别率达85%。
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