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农业部等有关部门组织的调查监测结果表明,主要农产品(包括粮、果、菜、肉、蛋、奶等)均有农药、重金属和亚硝酸盐的污染超标现象,我国畜产品的出口却频遇寒潮,出口量不足总产量的1%,其主要原因就是卫生标准不合格,药物残留超标。畜产品卫生状况及其安全性已成为限制我国畜产品出口的非关税贸易技术壁垒。因此研究能够快速判断食品毒性的检测方法成为现今国内外研究的热点。传统的生物毒性评价以哺乳类、鱼类等为受试对象,因此实验操作复杂、周期长,且仅适合于实验室内进行,不能满足快速监测需要。近年来,国内外研究人员一直在致力于生物毒性试验新方法的探索和研究。本论文基于细菌发光检测的毒性原理,利用生物统计学原理,建立了一套快速检测主要畜产品生物毒性的方法。
本文利用发光细菌发光原理,以青海弧菌(Vibro qinghaiensls sp.nov)作为毒性测试物种,采用二次二、三和四因子回归通用旋转组合实验设计和统计学方法,对重金属和兽药等农产品污染物进行了单一毒性和联合毒性研究,揭示了多种污染物共存时产生的总毒性效应、交互和主因子作用,并为各混合物构建了总生物毒性与其各污染物浓度的专用数学模型;并初步建立一套发光细菌法农产品食用安全性的快速评价体系,包括发光细菌法牛奶、鲜猪肉和牛肉食用安全性快速评价方法;该体系符合农产品安全检测快速、综合的需求,可为完善农产品安全预警体系和监督检测体系服务。
本研究所获的主要结论如下:
1 研究4种重金属和6种兽药表明,不同单一污染物对发光细菌的急性毒性不同,单一污染物对发光细菌的急性毒性不同,在一定浓度范围内,相对发光强度与污染物浓度呈负相关,相关系数大于0.9。
2 不同浓度的多元重金属混合物对发光细菌的联合毒性不同。根据试验结果,拟合出了7个相对发光率与重金属离子浓度的回归模型,经检验显著(P<0.01)且拟合效果好(R为0.936-0.996).本实验条件下,多元重金属混合物的联合毒性效应,因他们浓度区间而异。Cr6+和Cd2+对相对发光率都有相加效应的作用,从标准回归系数的比较中可以看出Cd6+的负效应明显要大于Cr6+;Cr+6和Pb2+对相对发光率都抑制效应,但是通过标准系数可以看出Cr6+相比pb2+对发光细菌的抑制作用更加明显,Cr6+和Pb2+之间的交互作用很显著,且两者间的交互作用为拮抗。Cr6+和Hg2+对相对发光率都有抑制作用,但是通过标准系数可以看出Cr6+相比Hg2+对发光细菌的抑制作用更加明显,Cr6+和Hg2+之间的交互作用很显著,且两者间的交互作用为拮抗。在本实验条件下,Pb2+和Cd2+混合物的毒性效应,因他们浓度区间而异。Cd2+和Hg2+对相对发光率都有效应作用,但是通过标准系数可以看出Cd2+相比Hg2+对发光细菌的抑制作用更加明显。不同浓度的Cr6+、Cd2+和Pb2+三元混合物对青海弧菌的毒性不同。影响相对发光率最大的是Cd2+,其次是Cr6+与Cd2+的交互作用,然后是Cr6++Pb2+,三种物质的交互作用对发光却有些微刺激的正效应。
3 不同浓度的多元兽药混合物对青海弧菌的毒性作用不同。在本试验条件下,多元兽药混合物的联合毒性效应,因他们浓度区间而异,总体上二元磺胺甲噁唑和磺胺喹噁啉混合物中二因子间为协同作用,而三元土霉素、喹乙醇与磺胺喹恶啉混合物中对相对发光率起负效应的是喹乙醇和磺胺喹恶啉,土霉素与喹乙醇间的联合作用为拮抗作用为主。 4 在前面工作的基础上,通过构建农产品安全性评价等级与30min相对发光率的关系,初步建立了发光细菌法农产品食用安全性快速评价体系,包括发光细菌法牛奶、鲜猪肉、牛肉和叶菜类蔬菜食用安全性快速评价方法。
5 发光细菌法是一种可以用来进行多元体系联合毒性研究的快速生物测试技术。它可快速评价农产品的综合生物毒性,对污染农产品进行初筛,可对多种有毒有害物质共存时产生的综合生物毒性进行评价,可对农产品中潜在的危险因素进行生物毒性的分析,具有实时检测,前处理简单,成本低廉等优点,在定性、半定量的现场快速检测中逐渐显现出了其优势,它将是现代食品安全监测技术的一个新的发展领域。