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半枝莲是唇形科黄芩属植物半枝莲(Scutellaria Barbata D.Don)的干燥全草[1],临床上常与其他药材配伍使用。研究表明,半枝莲具有抗氧化、抗病毒、抗菌以及治疗心脑血管疾病等多种作用。半枝莲总黄酮是其中的主要药理活性成分,含量较高,本实验将其作为主药制备微丸,并建立质量标准,为半枝莲单味制剂的生产应用提供实验依据。主要研究内容和结果如下: 将半枝莲于-20℃低温下超微粉碎50 min,粉末平均粒径为329.7 nm。以10倍量的0.3%L-精氨酸水溶液于25℃浸提2次,每次1h;浸提液用10%稀盐酸调至pH3.5,静置1h后滤过,沉淀得率为药粉的8.82%;滤液50℃减压浓缩至原体积1/10得浓缩液。总黄酮沉淀、半枝莲超微粉及浓缩液按6∶4∶5比例混合,挤出-滚圆法制备微丸。 本实验制备的微丸为棕色小球,表面光滑,10丸重7.50 mg,重量差异限度±5.5%,平面临界角ψ=12.6°,休止角α=20.2°,堆密度ρ=0.7963 g/ml,脆碎度Fr=2.40%,溶散时限均小于3 min。以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(88%)(4∶3∶5∶1)为展开系统,芦丁、柚皮苷、槲皮素、芹菜素、野黄芩苷作为对照品,对总黄酮沉淀及微丸进行聚酰胺薄层鉴别实验。结果样品与对照品在同一位置显示同样清晰斑点,其中芦丁和柚皮苷斑点清晰,形状圆整,分离度好,Rf值适宜。 L-精氨酸浸提液、总黄酮沉淀和微丸在287 nm处紫外分光光度法测定总黄酮含量,总黄酮含量以芦丁计分别为0.25%、51.29%、31.91%;以柚皮苷计分别为0.23%、48.77%、31.05%;以槲皮素计分别为0.19%、39.53%、25.18%;以芹菜素计分别为0.19%、32.46%、20.31%;以野黄芩苷计分别为0.20%、41.27%、25.83%。 高效液相色谱法以3%醋酸水溶液和甲醇为流动相,梯度洗脱,测定半枝莲L-精氨酸浸提液、总黄酮沉淀和微丸中槲皮素、芹菜素及野黄芩苷的含量,结果各指标成分在浸提液中含量分别为0.03%、0.03%、0.04%;沉淀中含量分别为7.00%、5.98%、7.64%;微丸中含量分别为3.91%、3.47%、4.51%。 目前,黄酮苷类以及极性稍大的苷元多用乙酸乙酯、甲醇、乙醇或水醇混合溶剂提取;多数黄酮苷元用低极性溶剂氯仿、乙醚或苯进行提取[2-5],有机溶剂用量大,回收溶剂耗时耗能,成本高、不环保。黄酮类大多具有酚羟基,易溶于碱性水而难溶于酸性水,常用氢氧化钠等无机碱性水提取,再将碱水提取液调成酸性,黄酮类即可沉淀析出[6-7]。碱提酸沉法常用碱中氢氧化钠水溶液浸出能力强,但杂质多不利于纯化;石灰水可使鞣制等水溶性杂质生成钙盐沉淀,但有些黄酮类化合物也与钙结合生成不溶性物质被滤除;碳酸钠碱水溶液浸出能力较差。值得注意的是,应用上述碱液提取时,碱度很难控制,由于强碱可破坏黄酮类化合物母核结构,且强碱性下沉淀黄酮类化合物加酸较多,酸性过强时黄酮类化合物会形成锌盐重新溶解,降低产品收率。 本研究①L-精氨酸水提植物中黄酮类化合物通用性高,节能、省时、环保,提取效率高,具有广泛的应用价值。②-20℃低温下进行超微粉碎,细胞破壁率高,利于有效成分的释放;低温粉碎避免黄酮类化合物受热分解,利于药效的发挥;微粉化药材纤维细腻,做稀释剂使用无砂砾感。微丸制备未添加半枝莲药味以外辅料,增加了微丸载药量,降低了生产成本。③聚酰胺薄层层析为中药半枝莲的薄层鉴别作参考(目前国家药典半枝莲药材薄层鉴别一项尚属空缺);④HPLC中行之有效的梯度洗脱和多波长检测为黄酮类化合物分析提供借鉴。 继续开展半枝莲L-精氨酸水提酸沉物与半枝莲L-精氨酸水提浓缩浸膏的血清药物化学以及药效学实验,可为半枝莲制剂制备工艺及产品开发提供可靠依据。