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研究背景:肝癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)在我国属于高发病率和高死亡率的癌症。目前,HCC的各种检测方法分别受其技术特点的限制,均存在特异性低、取样不便和不能早期诊断等缺陷。近年来有大量研究表明:随着肿瘤的发生发展,患者的肿瘤组织、血清和唾液等体液中发生了糖蛋白糖基化异常改变。实验方法:本研究以唾液为检测样本,比较健康志愿者(Healthy Volunteers,HV),慢性乙型肝炎患者(Viral Hepatitis-B Patients,HB),乙肝后肝硬化患者(Hepatic Cirrhosis Patients,HC)和HCC患者的唾液糖蛋白糖链差异。利用一款本实验室自制的专用于肝病检测的小规模凝集素芯片对215例唾液样本(51例HV,51例HB,68例HC和45例HCC)进行逐例检测,目的是筛选可以特异性指示HCC患者唾液异常糖基化的凝集素;并且进一步利用90例慢性肝病患者唾液样本(30例HB,30例HC和30例HCC)和30例HV唾液样本进行唾液芯片、凝集素印迹实验验证。此后利用该凝集素偶联磁性微粒并分离纯化特定的糖蛋白,对分离纯化获得的糖蛋白糖链结构进行解析。实验结果:通过小规模凝集素芯片对215例唾液样本的逐例检测,分析发现四棱莲凝集素(Lotus Tetragonolobus Lectin,LTL)所识别的Fucα1-2Galβ1-4Glc NAc和Fucα1-3(Galβ1-4)Glc NAc结构在HCC患者唾液中表达水平最高(p≤0.0005);进一步利用90例慢性肝病患者唾液样本和30例HV唾液样本,通过唾液芯片、凝集素印迹等方法验证了LTL所识别的Fucα1-2Galβ1-4Glc NAc和Fucα1-3(Galβ1-4)Glc NAc结构在肝癌患者唾液中高表达(p<0.0001);利用LTL-磁性微粒复合物(Lectin Magnetic Particle Compounds,LMPCs)分离纯化出了四组混合样本中具有Fucα1-2Galβ1-4Glc NAc和Fucα1-3(Galβ1-4)Glc NAc结构的糖蛋白,进一步通过PNGase F酶切法和Na Cl O氧化法分别分离糖蛋白上的N-糖链与O-糖链,经纯化后由MALDI-TOF/TOF-MS鉴定并推测出具体的糖链结构。在HV、HB、HC和HCC患者唾液中分别鉴定到了21/20、25/18、29/19和28/24种N-/O-糖链。由于LTL特异识别Fucα1-2Galβ1-4Glc NAc和Fucα1-3(Galβ1-4)Glc NAc结构,分析统计出了16/8、18/8、19/10和18/16种各组的含Fucα1-2Galβ1-4Glc NAc和Fucα1-3(Galβ1-4)Glc NAc结构的岩藻糖基化N-/O-糖链,发现了8种岩藻糖基化O-糖链(m/z 652.216,828.269,833.314,995.367,1144.295,1157.420,1163.417和1193.402)仅存在于HCC患者的唾液中。综合上述研究结果,表明肝癌患者唾液中存在特异的岩藻糖基化O-糖链,鉴定到的特定岩藻糖基化O-糖链有望作为肝癌唾液诊断的标志物。