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目的:建立经细胞因子体外诱导分化健康成人外周血而来的γδT细胞培养体系,观察不同浓度(0ug/ml、1ug/ml、5ug/ml、10ug/ml)人参皂苷Rg3(Ginsenoside Rg3)对γδT细胞表面表达水平的影响。 方法:在无菌的条件下,将健康成人外周血采用密度梯度离心法分离获得单个核细胞,用重组人IL-2(1000IU/ml)、唑来膦酸(5umol/l)等细胞因子诱导扩增γδT细胞。采用直接细胞计数法分别于培养的第0、4、7、10天观察γδT细胞增殖速度。于体外培养的第10天将其分为四组,每组各设4个复孔,分别加入二甲基亚砜(DMSO)溶解的人参皂苷Rg3溶液,使其终浓度分别为(0ug/ml、1ug/ml、5ug/ml、10ug/ml),记为Rg3-I组、Rg3-II组、Rg3-III组、Rg3-IV组。然后接种在24孔板上,继续的培养,48小时后用流式细胞仪检测各组γδT细胞及表面标志(CD3、CD107a、CD44)的表达量变化。 结果:(1)在培养的第10天加入不同浓度人参皂苷Rg3共培养48小时后实验组的γδT细胞纯度即Anti-TCR-γδ标志表达明显增高,实验组与对照组比较后差异有统计学意义(P<0.05);各实验组细胞Anti-TCR-γδ标志表达有差异,但实验组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。其中细胞标记Anti-TCR-γδ标志在不同浓度组(0ug/ml、1ug/ml、5ug/ml、10ug/ml)分别为(51.91±5.17)%、(65.78±7.70)%、(71.91±9.09)%、(74.14±7.88)%。(2)中、高剂量人参皂苷Rg3的实验组CD44表面标志表达高于对照组和低剂量实验组,且差异有统计学意义(P<0.05),但低剂量实验组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),其中γδT细胞标记CD44标志在不同浓度组(0ug/ml、1ug/ml、5ug/ml、10ug/ml)分别为(97.88±1.17)%、(98.16±1.21)%、(98.91±0.48)%、(99.48±0.29)%。(3)CD107a方面,中、高剂量人参皂苷Rg3的实验组表面标志表达优于对照组,并且在一定浓度条件下有剂量依赖性,比较差异有统计学意义(P<0.05);低剂量人参皂苷Rg3的实验组CD107a标志表达与对照组有差异,但比较差异无统计学意义(P>0.05)。其中γδT细胞标记CD107a标志在不同浓度组(0ug/ml、1ug/ml、5ug/ml、10ug/ml)分别为(23.49±3.10)%、(30.07±3.18)%、(43.86±9.10)%、(54.19±10.45)%。(4)各组细胞间CD3表面标志表达有差异,但分别与对照组比较差异没有统计学意义(P>0.05),其中γδT细胞标记CD3标志在不同浓度组(0ug/ml、1ug/ml、5ug/ml、10ug/ml)分别为(95.07±2.24)%、(96.77±1.89)%、(97.18±1.54)%、(97.46±2.06)%。 结论:不同浓度人参皂苷Rg3均可促进γδT细胞Anti-TCR-γδ标志表达,即可明显提高γδT细胞纯度(P<0.05),但低、中、高剂量组促进细胞Anti-TCR-γδ标志表达作用较为相近(P>0.05);中、高剂量人参皂苷Rg3可促进γδT细胞CD107a标志表达(P<0.05),且在一定浓度下呈剂量依赖性;γδT细胞CD44标志的表达受中、高剂量的Rg3影响(P<0.05),但低剂量组Rg3对γδT细胞该标志的表达影响不明显(P>0.05);各实验浓度的人参皂苷Rg3对细胞表达CD3标志无明显影响(P>0.05)。