人CD4胞外区及人和小鼠MHCⅡ分子胞外区的表达及活性鉴定

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CD4分子在机体免疫系统中起重要作用,它与MHCⅡ、TCR相互作用,形成CD4-MHCⅡ-TCR复合物,介导特异性抗原呈递以及激活CD4+T细胞,引发机体特异性的免疫应答。同时,CD4是HIV感染的宿主细胞上主要受体,CD4融合蛋白的药物及CD4的抗体在艾滋病的临床研究中显示了良好的治疗效果。   本研究尝试通过真核及原核表达系统对人CD4蛋白胞外段进行表达。真核表达中,应用CHO细胞和293FT细胞分别表达CD4蛋白胞外段,仅含有信号肽的序列有小量表达。原核表达中,应用大肠杆菌BL21菌表达的人CD4胞外段不同域以包涵体的形式存在,经尿素变性及复性,再经分子筛纯化之后,其纯度能够达到90%以上。经HIV-1NL4-3细胞中和实验,表明CD4(d1),CD4(d1-2),CD4(d1-4)有阻断HIV-1NL4-3病毒感染TZM-b1细胞的能力,因此表达的蛋白是有活性的。因此通过大肠杆菌这一原核表达系统表达的人CD4蛋白胞外段不同域,可用于进一步分析CD4抗体的结合表位及动物免疫等研究。   本研究还通过大肠杆菌ER2566原核表达系统对人及小鼠MHCⅡ蛋白胞外段进行表达。目的蛋白同样以包涵体的形式存在,经尿素变性及复性,再经分子筛纯化之后,其纯度能够达到90%以上。经竞争实验和Cell Counting Kit-8检测,表明小鼠MHCⅡ蛋白胞外段a链有活性,其他蛋白无活性或低活性,可能与氨基酸突变有关,需要进一步实验验证。
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