大白菜灰霉菌和霜霉菌抗性机制初探

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灰霉病(Botrytis cinerea)和霜霉病(Hyaloperonospora parasitica)是危害十字花科蔬菜尤其是大白菜(Brassica campestris ssp.pekinensis Makino)正常生长的真菌病害。本研究以大白菜为材料,分析了大白菜与真菌互作过程中部分生理指标与抗病性的关系,同时分析了抗病基因ADF基因家族的特性及其受真菌侵染时的表达变化,以期为进一步探讨其作用机理提供理论依据。  1.本试验以大白菜抗病品种‘新烟杂3号’和感病品种‘包头莲’为材料,对与植物抗病性相关的可溶性蛋白和相关的保护酶(POD、SOD、CAT)、MDA及活性氧进行了研究。结果发现可溶性蛋白含量增高,而且抗病品种的增加程度比感病品种要大,可溶性蛋白的含量与大白菜霜霉病菌的抗性成正相关。试验同时证明O2-生成速率越高,大白菜抗性就越强。POD、SOD和CAT在大白菜‘新烟杂3号’中的酶活性都比‘包头莲’的高,而MDA的含量在‘包头莲’中较高。  2.本试验从拟南芥数据库中获得AtADF基因,将其在大白菜数据库中进行比对,再利用NCBI数据库中的BLASTn和BLASTp程序进行相似性比对分析后,可以得到19个大白菜ADF基因,它们均具有完整的ORF结构。对几个物种中ADF7编码的氨基酸序列进行比对发现,大白菜、不结球白菜和拟南芥之间的亲缘关系较近。大白菜基因家族生物信息学分析结果显示,ADF基因家族成员在相对分子质量、等电点和编码氨基酸序列的长度方面是相近的,ADF7和ADF10的同源性是该家族成员中最高的。基因在染色体上的定位显示,大白菜染色体上的基因与拟南芥染色体上的基因不存在复制关系,两者可能不存在直接的进化关系。本研究对大白菜基因组中所有ADF基因成员进行了分析,为进一步研究该基因的功能奠定了良好的基础。  3.已有研究表明,肌动蛋白细胞骨架在阻碍真菌进入植物细胞中扮演着重要角色,ADF蛋白能增加肌动蛋白丝的聚合程度以抵御真菌侵染。ADF基因家族在大白菜正常组织中具有组织特异性表达的特点,在叶中表达最明显,根中表达最低。实时定量数据显示,在大白菜与灰霉菌和霜霉菌的互作反应中,初次侵染阶段为6h到12h,大多数基因在侵染12h后出现表达的小高峰,在24 h后出现表达低峰,48 h后出现表达最高峰。所有基因在抗病品种‘Y3’中的表达明显高于易感病品种‘BTL’,ADF基因家族中ADF8、ADF15、ADF16、ADF18和ADF19在抗病原菌的过程中表达较明显,这些基因在抵抗真菌侵染方面起到很重要的正调控作用。
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