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目的:探讨表观治疗对非小细胞非小细胞肺癌(NSCLC) DNMT1表达的影响特点及生物学作用。方法:本研究分为两部分。第一部分:表观治疗对NSCLC中DNMT1的影响及作用机制的研究:1.表观治疗对NSCLC中DNMT1表达的影响。非小细胞肺癌细胞分为对照组(未用药)、5-AZA-CDR治疗组(1~3天)、MS-275治疗组(第4天)及混合治疗组(第1-3天,5-AZA-CDR;第4天,MS-275),治疗后收集细胞,提取蛋白通过Western blotting技术对DNMT1表达进行分析;2.表观治疗抑制DNMT1表达的作用机制,按照第一部分治疗方案收集细胞样本,提取总RNA,进行逆转录合成cDNA,然后进行qRT-PCR分析。第二部分:表观治疗的用药浓度及治疗后非小细胞肺癌细胞中DNMT1变化的研究。1.表观治疗药物治疗NSCLC的最佳用药浓度的探究:对非小细胞肺癌细胞分为对照组(未用药)、5-AZA-CDR治疗组(1-3天)、MS-275治疗组(第4天)及混合治疗组(第1~3天,5-AZA-CDR;第4天,MS-275),加入不同浓度的药物,通过MTT及Western blotting技术探索治疗非小细胞肺癌细胞的最佳用药浓度;2.表观治疗结束后非小细胞肺癌细胞中DNMT1表达的变化。表观治疗后,收集停药后不同时间段的非小细胞肺癌细胞,进行Western blotting分析,来检测停药后DNMT1在非小细胞肺癌细胞中表达的变化。结果:第一部分:1.表观治疗后,治疗组DNMT1表达水平均低于未治疗组,联合治疗组较5-AZA-CDR治疗组有效,而5-AZA-CDR治疗组比MS-275治疗组效果明显;2.通过qRT-PCR研究证明了DNMT1生成减少是其在细胞中表达降低的主要原因。第二部分研究发现,表观治疗药物如果药物浓度过小对DNMT1抑制效果不明显,若用量过大则会产生细胞毒性;表观治疗结束时对非小细胞肺癌细胞中DNMT1的抑制作用最强,但随着停药时间的延长,DNMT1表达水平有所恢复;而且不同细胞株对表观治疗的敏感性不同。结论1.表观治疗能有效抑制NSCLC中)NMT1基因的表达,而且对NSCLC生长有抑制作用,并能诱导其死亡。DNA甲基化转移酶抑制剂5-AZA-CDR对DNMT1的抑制作用较去乙酰化酶抑制剂MS-275直接有效,联合用药效果更佳。表观药物对DNMT1的抑制作用主要体现在阻碍其生成。2.表观治疗药物如果药物浓度过小对抑制DNMT1效果不明显,若用量过大则会产生细胞毒性,而且不同细胞株对表观药物的敏感性不同。3.表观治疗后,随着停药时间的延长,DNMT1的表达水平逐步恢复,进一步说明表观遗传可以逆转的性质。