刺参及其煮制品冷藏过程中品质变化机制及调控

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海参是重要的海洋经济动物,我国的年产量超过22万吨,产值超过500亿元。海参具有较强的自溶能力,在受到外界的理化刺激后,其体壁会发生自降解,破坏海参品质,造成了严重的经济损失。内源蛋白酶是引起海参体壁自降解的直接原因,但具体哪类酶发挥关键作用尚不明确,因此很难建立有针对性的调控方法。新鲜海参运输及贮藏困难,捕捞后通常先进行热处理,再结合其它工艺制成即食海参等制品。热加工海参制品贮藏过程中,硬度和咀嚼性等质构参数逐渐降低,影响其食用品质,但机制尚不明确,也缺乏有针对性的调控方法。基于此,本论文揭示了鲜活海参贮藏过程中体壁自降解的酶学机制和热加工即食海参贮藏过程中质构劣化的机制,初步建立调控方法,为鲜活海参及热加工海参制品贮藏过程中的品质保持与提升提供参考。(1)提取刺参体壁胶原纤维,采用从刺参肠中提取的内源性蛋白酶对其进行降解,研究胶原纤维的结构变化,初步揭示导致刺参体壁自降解的关键蛋白酶,并采用内源性基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)抑制剂处理离体的刺参体壁组织块,进一步验证其在刺参体壁自降解过程中发挥的作用。结果表明,刺参体壁胶原纤维经内源性MMP酶解后,胶原原纤维间蛋白聚糖桥连结构遭到破坏,胶原纤维完全解聚为胶原原纤维束和单根的胶原原纤维,但胶原原纤维结构仍较为完整。同时,内源性MMP对胶原纤维的降解导致可溶性羟脯氨酸、吡啶交联结构和糖胺聚糖的释放,但胶原蛋白的三螺旋结构仍基本保持。此外,MMP抑制剂(1,10-菲啰啉)可显著抑制离体刺参体壁组织块的自降解。因此,MMP是导致刺参体壁自降解的关键内源蛋白酶,但其降解作用主要体现在对胶原纤维等胶原高层级结构的破坏上,而非对胶原蛋白本身的破坏上。(2)以新鲜刺参为原料,分别向鲜活刺参体腔注入特异性MMP抑制剂(1,10-菲啰啉)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(苯甲基磺酰氟(PMSF)和甲苯磺酰-苯丙氨酸氯甲基酮(TPCK))和半胱氨酸蛋白酶抑制剂(L-反-环氧琥珀酰基-亮氨酰氨基(4-胍基)丁烷(E-64)),研究刺参体壁理化特性及微观结构的变化,进一步揭示刺参自降解的关键酶及降解机制。结果表明,MMP抑制剂(1,10-菲啰啉)可显著抑制刺参体壁的自降解,而丝氨酸蛋白酶抑制剂和半胱氨酸蛋白酶抑制剂则不能影响刺参的自降解过程,表明内源性MMP是导致刺参体壁自降解的关键蛋白酶。以白藜芦醇作为荧光标记物,揭示了抑制剂可以从刺参体腔向刺参体壁迁移扩散。刺参体壁中游离钙离子浓度和MMP活性均先升高,4 h达到最大值,然后降低,表明游离钙离子可能激活了刺参体壁中的MMP,导致刺参体壁的自降解。MMP抑制剂(1,10-菲啰啉)处理后,刺参体壁中游离钙离子浓度和MMP活性均显著降低,因而有效地抑制了刺参体壁自降解的发生。(3)以新鲜刺参为原料,将其贮存在含天然抗氧化剂和金属离子螯合剂的水溶液中,研究调节剂对刺参体壁自降解的抑制作用及机制。结果表明,茶多酚(TP)、竹叶抗氧化物以及茶黄素等天然抗氧化剂均能轻微抑制刺参体壁自降解,其中TP在食品工业中最为常用。而在草酸(OA)、植酸和乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2)等金属离子螯合剂中,OA的抑制效果最佳。据此,将TP和OA组合使用,取得了更好的抑制效果。刺参受到外界刺激后,钙离子可能从细胞内释放到胞外结缔组织,激活MMP。被激活的MMP通过降解微纤维网络结构和胶原原纤维间蛋白聚糖桥连结构引起自由水的释放,从而导致刺参体壁发生粘液样变性。调节剂(OA+TP)通过在组织中螯合游离钙离子,显著抑制了MMP的激活,从而有效地延缓了刺参体壁的自降解进程。(4)以刺参体壁为原料,将其在含有不同浓度调节剂(乳酸(LA)+TP)的水溶液中熟化后真空包装,在沸水浴中灭菌,随后在4℃条件下冷藏不同时间,研究刺参煮制品在冷藏过程中质构变化的机制及调控方法。结果表明,煮制过程中,调节剂(LA+TP)通过抑制刺参体壁内源性蛋白酶的活性,抑制蛋白的降解,使刺参的质构和流变学指标呈现较高的值。刺参煮制品冷藏过程中,羰基含量、硫代巴比妥酸值和自由基强度等氧化指标呈时间依赖性增加,说明氧化可能导致质构品质的劣化。同时,调节剂(LA+TP)通过阻止蛋白质的氧化,显著抑制了冷藏过程中刺参煮制品体壁水溶性羟脯氨酸、糖胺聚糖、蛋白质和TCA-可溶性肽含量的增加、蛋白质二级结构的解体、组织中平均孔面积和孔径的增加、蛋白质与水结合力的下降和水分的损失,以及持水力的下降,最终延缓了刺参煮制品冷藏过程中质构品质的劣化。综上,MMP是导致刺参体壁自降解的关键内源蛋白酶,特异性MMP抑制剂可从体腔向体壁组织迁移扩散,在组织中螯合游离钙离子,抑制MMP的激活,从而延缓刺参体壁的自降解进程。蛋白质氧化是导致刺参煮制品冷藏过程中质构品质劣变的主要原因,调节剂(LA+TP)通过抑制煮制过程中内源蛋白酶对蛋白质的降解、冷藏过程中蛋白质的氧化,显著延缓了刺参煮制品冷藏过程中质构品质的劣化。
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