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玉米茎基腐病是全球性病害,在我国玉米主产区也很常见,且呈上升趋势,造成严重减产。本研究利用分子标记技术,在DNA水平上研究抗病自交系携带的玉米肿囊腐霉茎基腐病抗性基因,寻找与玉米茎基腐病抗性基因连锁的分子标记,进而确定它们在染色体上的位置,这对于借助分子标记开展辅助育种,提高育种效率和进行定位克隆,最终克隆基因,具有重要意义。 本研究采用1145×Y331的F2分离群体为实验材料,1145为抗病亲本,Y331为感病亲本。玉米茎基腐病病原菌为肿囊腐霉(Pythium inflatumMalthews)。应用RAPD标记技术,结合集群分离分析的方法(BSA)寻找与玉米肿囊腐霉茎基腐病抗性基因连锁的分子标记。主要结果如下:1、选取Operon公司的Kit A-Z共520个10bp碱基的随机引物对亲本和 抗感病近等基因池进行筛选,145个能在两亲本之间扩增出多态性,40 个引物在抗病池和感病池之间能扩增出多态性。通过多次重复及分 析,其中11个引物能够产生在亲本之间与池之间表现一致的差异带。 即OPA04、OPF09、OPF15、OPI16、OPR05、OPS01、OPS08、OPT12、 OPU10、OPU16、OPZ19。2、以11个多态性引物对F2群体60个单株进行RAPD分析,发现 OPZ191500、OPR051033、OPA04880、OPF091100、OPS08653、OPU161000 与肿囊腐霉茎基腐病抗性基因连锁。其中OPZ19的重组率为16.6%, OPA04的重组率为10%,OPF091100的重组率为8.3%。3、将上述6个片段分别回收,克隆在pGEM-T Easy Vector载体上,分 别以克隆子质粒为探针,对F2分离群体的亲本DNA进行RFLP分析, 结果表明:OPA04880。为多拷贝序列,OPR051033、OPU161000为重复顺 序,无法用于定位。OPZ191500为单拷贝序列,可以用于染色体定位。4、以杂交组合S3×Mo17的F6代RILs为定位群体对OPZ191500进行定 位,结果表明:OPZ191500和isu120,isu36,isu97,csu294在同一个连锁 群中,这几个标记(锚定标记)都已知位于第4染色体上,所以OPZ191500 必定在第4染色体上,而玉米肿囊腐霉茎基腐病抗性基因与OPZ191500 连锁,因此也必定位于第4染色体上。5、本文首次命名玉米肿囊腐霉茎基腐病抗性基因,为Rpil基因,并完成 其染色体定位。