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第一部分凋亡肿瘤细胞负载的树突状细胞疫苗抗肺癌的实验研究目的:从健康人外周血中诱导树突状细胞(dendritic cells,DCs),通过凋亡肿瘤细胞负载联合CD40单抗促进DCs成熟构建DCs疫苗,并用DCs疫苗激活抗原特异性的细胞毒性T细胞(CTL),观察其体内外抗肺癌的特性。方法:采用常规Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),培养2小时后贴壁细胞采用含GM-CSF(100μg/L)﹑IL-4(50μg/L)、10%FCS的RPMI-1640培养DCs,在DCs培养的第6天,以诱导凋亡的A549进行抗原负载(DCs:凋亡细胞=5:1),24 h后加入激发型CD40单克隆抗体(5mg/L)继续诱导2d,诱导DCs成熟;收集成熟的DCs与自体T细胞按1:50的比例混合共育7天,诱导抗原特异性的CTL细胞;流式细胞仪检测细胞表型的变化;四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞毒活性;用人肺癌细胞株A549建立荷瘤裸鼠模型研究CTL体内的抗肺癌的活性。结果:凋亡肿瘤细胞负载可使DCs上调表达CD1α、CD80、CD83、CD86和HLA-DR,联合CD40mAb可进一步促进DCs的成熟;成熟DCs和自体的T细胞共育活化抗原特异性CTL;与未活化前相比,CTL的CD8+T细胞大幅度上调(P<0.05),并上调表达CD3、CD25、CD28、CD8/CD28分子;CTL对A549具有高效特异的杀伤力,明显强于CTL对肝癌细胞HepG2的作用(P<0.01);体内实验表明,CTL可有效抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,与生理盐水组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:体外成功构建树突状细胞疫苗,其诱导的抗原特异性的CTL在体内外均能够有效的抑制肺癌细胞的生长。