【摘 要】
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为进一步完善现有动物源性饲料检测体系,本研究建立了饲料中动物源性成分的PCR检测方法;并且通过实地调研、随机抽样初步了解我国奶业主产区动物源性饲料的使用情况。本论文
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为进一步完善现有动物源性饲料检测体系,本研究建立了饲料中动物源性成分的PCR检测方法;并且通过实地调研、随机抽样初步了解我国奶业主产区动物源性饲料的使用情况。本论文从以下三个方面进行研究:一、我国部分地区动物源性饲料使用情况的初步调研:河北、黑龙江、内蒙古自治区包头市的调研结果显示,201户养殖户中有9户养殖户在奶牛饲料中添加肉骨粉、鱼粉等动物源性饲料,占调查总数的4.48%。二、饲料中动物源性成分PCR检测方法的建立本研究使用Qiagen公司的组织DNA提取试剂盒提取核酸。根据牛、羊、猪、鸡、鱼以及马的mtDNA的16S rRNA基因序列选用了一对通用引物,初步判断样品中是否含有动物源性成分;牛、羊引物选用已报道的特异性引物;根据猪、鸡线粒体DNA的ATPase8区特异保守区、鱼线粒体DNA 16S rRNA序列设计并筛选了猪源性特异引物Pig9044/9066F/Pig9294/9314R、鸡源性特异引物Chicken9129/9151F/Chicken9305/9327R和鱼源性特异引物NC_Fish2480/2501F/ NC_Fish2565/2586R。PCR检测结果表明,牛、羊、猪、鸡、鱼引物特异性好,扩增的目的片段大小分别为271bp、275bp、271bp、199bp、107bp;可以检出0.1%的牛、羊、猪、鸡、鱼源性成分。同时,使用氯仿和0.5%次氯酸钠溶液对检出牛源性成分的样品进行处理,最终实现肉骨粉和奶粉的区分。三、饲料中动物源性成分PCR检测方法的应用:本研究在我国奶业主产区的奶牛集中养殖区域北京、天津、河北等地进行实地随机抽样,共采集样品364批次。应用本文所建立的方法对这些饲料样品进行检测,共检出动物源性成分66批次,占总样品数的18.13%;牛羊用饲料中检出猪、鱼源性成分,未检出牛、羊源性成分;动物源性饲料检出不同比例的牛、羊、猪、鸡、鱼源性成分。
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