目的:胃癌是一种发病率高、死亡率高的恶性肿瘤,目前胃癌总体疗效尚不满意,五年生存率低,而复发转移是其主要致死原因。近年来研究发现,CDK5RAP3在调控转录和细胞周期进展的信号通路中发挥作用,并且参与了多种肿瘤的发生发展,其选择性剪接导致多种转录变异体编码不同的异构体。本课题探讨了人CDK5RAP3基因的剪接变异体CDK5RAP3 isoform d(IC53d)在胃癌增殖方面的作用。本课题首先通过检测IC53d在胃癌组织中的转录水平,分析其转录水平与临床病理资料的相关性;其次通过体内外分子生物学实验,研究过表达IC53d对胃癌细胞增殖能力的影响;最后,通过蛋白质印迹及免疫荧光等技术探讨IC53d对胃癌细胞增殖能力的作用机制。本研究旨在明确IC53d在胃癌增殖中所扮演的角色及潜在的作用机制,为胃癌的早期干预及潜在靶点治疗提供新的理论基础。方法:1.采用q PCR(Quantitative Polymerase Chain Reaction)检测IC53d在胃癌组织样本中的转录水平并分析其与胃癌患者临床病理资料的关系;2.利用慢病毒构建相应的稳转细胞系(MGC-803和AGS);3.采用细胞计数、CCK8和平板克隆实验检测过表达IC53d对胃癌细胞增殖能力的影响;4.采用MGC-803稳转胃癌细胞株构建裸鼠皮下成瘤模型,体内验证IC53d对裸鼠皮下肿瘤形成的影响;5.采用Western Blot及IF(Immunofluorescence technique)研究IC53d促进胃癌细胞增殖可能存在的分子机制。结果:1.相较于癌旁组织,IC53d在胃癌组织中的转录水平显著上调(P<0.05);2.IC53d的表达水平影响胃癌细胞的增殖能力,稳定过表达IC53d的胃癌细胞的增殖能力增强;3.过表达IC53d能促进AKT的473位点磷酸化,进而促进GSK3β磷酸化,从而使cyclin D1的表达水平上调,促进胃癌细胞的增殖能力、集落形成能力,并能够促进胃癌细胞G1/S期转换,增强裸鼠体内成瘤能力;4、过表达IC53d使cyclin D1表达水平上调,而cyclin D1高表达的胃癌患者预后明显低于cyclin D1低表达者。结论:IC53d在胃癌组织中表达上调,过表达IC53d促进AKT和GSK3β的磷酸化进而使cylin D1的表达上调,引起G1/S期转换,从而加快细胞周期进程促进胃癌细胞的增殖。