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目的:探讨白藜芦醇对肿瘤微环境下小鼠黑色素瘤细胞B16F10侵袭转移的抑制作用及其机制。方法:1)将小鼠黑色素瘤细胞B16F10用不同浓度的白藜芦醇(25μM、50μM、100μM、200μM、400μM)处理24小时后,运用CCK8实验检测白藜芦醇对小鼠黑色素瘤细胞B16F10增殖抑制;运用CCK8实验检测白藜芦醇对肿瘤微环境下小鼠黑色素瘤细胞B16F10的增殖抑制;收集小鼠单核巨噬细胞Raw264.7的上清作为条件培养基培养B16F10细胞,模拟肿瘤微环境,伤口愈合实验与Transwell侵袭实验检测B16F10细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测B16F10细胞中肿瘤相关蛋白E-cadherin与Vimentin的表达及通路蛋白p-STAT3的表达。2)B16F10细胞分别转染S1PR1质粒与S1PR1 siRNA,过表达和敲低细胞中S1PR1的表达;伤口愈合实验与Transwell侵袭实验检测B16F10迁移和侵袭能力;Western blot实验检测B16F10细胞中通路蛋白S1PR1与p-STAT3的表达。3)Raw264.7细胞转染过表达S1PR1蛋白的病毒载体,收集培养上清,制备条件培养基。条件培养B16F10细胞24小时,收集细胞尾静脉注射B16F10细胞,建立小鼠肺转移模型。造模第一天开始,灌胃给予白藜芦醇100mg/kg,每天2次,共21天;末次给药后,脊椎脱臼处死,取肺组织,统计肺转移灶,拍照。Western blot实验检测小鼠肺组织中肿瘤相关蛋白E-cadherin、Vimentin、Twist与Snail的表达。结果:1)CCK8结果显示,白藜芦醇对B16F10细胞的增殖具有抑制作用,并具有剂量依赖的特点;浓度低于100μM,白藜芦醇对条件培养B16F10细胞的增殖抑制不显著,故本实验选取25μM、50μM、100μM三个浓度的白藜芦醇进行研究。伤口愈合实验及Transwell侵袭实验实验表明,与空白对照组比较,条件培养组B16F10细胞的迁移与侵袭能力增强,经白藜芦醇处理后,细胞的迁移与侵袭能力下降。Western blot结果显示,与空白对照组相比,条件培养组细胞中E-cadherin表达下降,Vimentin表达升高,但经白藜芦醇处理后,E-cadherin表达升高,Vimentin表达降低。2)伤口愈合实验及Transwell侵袭实验实验表明,S1PR1的敲低降低了B16F10细胞迁移与侵袭能力,经白藜芦醇处理后,B16F10细胞迁移进一步的下降;S1PR1的高表达增加了B16F10细胞迁移与侵袭能力,而白藜芦醇抑制了这种现象。Western blot结果显示,白藜芦醇抑制了条件培养组细胞p-STAT3的表达的升高;而在机制研究中发现,与空白对照组比较,S1PR1敲低组细胞中p-STAT3的表达下降;S1PR1过表达组p-STAT3的表达升高,经白藜芦醇处理后,p-STAT3的表达降低;3)解剖小鼠发现,与空白对照相比,条件培养组小鼠肺转移结节增多,给予白藜芦醇治疗后,小鼠肺转移结节数量减少。Western blot结果显示,与空白对照组比较,条件培养组小鼠肺组织中的Vimentin、Twist与Snail表达升高,E-cadherin的表达下降;给予白藜芦醇治疗后,Vimentin、Twist与Snail表达降低,E-cadherin蛋白的表达上升。结论:通过构建体内外侵袭转移模型,白藜芦醇对肿瘤微环境中B16F10细胞的侵袭转移具有抑制作用,并且其可能是通过S1P/S1PR1/STAT3信号发挥作用。