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全球范围内,死于肝病的患者的人数正逐年增长,用于肝病治疗的有效手段仍然匮乏,现有的治疗方案虽然能部分治愈肝病患者,却存在许多不足,因此,新的有效的治疗方法的开发迫在眉睫。造血干细胞具有很强的横向分化能力和扩增能力,造血干细胞的这些特性为肝病的治疗的研究提出了新的方向。本文从体外诱导和SCID小鼠模型内诱导两个角度研究了造血干细胞向肝脏细胞的转化情况,得到了初步的研究结果。在体外诱导部分,研究首先以单个核细胞为起始细胞,依次考察了接种密度、细胞因子和培养条件对造血干细胞转分化的影响,从而确定了2×106cells/ml的接种密度,OSM+SCF+LIF+FGF-a+FGF-β+HGF+EGF的细胞因子组合和IMDM培养基+胰岛素+丙酮酸钠的培养体系作为诱导培养的最佳条件,这些条件的组合不仅能够将细胞总数维持在一定的水平(3周后仅从2×106个降至1.1×106个),还能在培养的第一周即实现转化,在培养结束时达到50﹪以上的转化率。随后,研究又以CD34+细胞为起始细胞,沿用单个核细胞培养中的最佳条件进行体外培养,CD34+细胞在培养过程中扩增了近30倍,虽然转化启动的时间较晚,在培养的第3周,但细胞能在1周内实现转化,4周时即已达到了60﹪以上的转化率。
在SCID小鼠模型诱导实验中,研究首先确定了0.4ml/kg的CCl4为小鼠肝脏的破坏剂量,随后进行了CD34+细胞在小鼠体内随时间变化的实验研究。研究发现CD34+细胞在SCID小鼠体内向肝脏细胞的转化是个缓慢而渐变的过程,CD34+细胞首先从外周血迁移至肝脏,在4周时,仅能在小鼠肝脏中检测到少量的人源血细胞,CD45+细胞比例仅为1.9﹪;6周时开始检测到人源肝脏细胞;8周时,迁移过程达到顶峰,CD45+细胞比例上升至6.91﹪;10周时,小鼠体内人源肝脏细胞的数量大幅上升,转化过程基本完成;15周时,小鼠体内人源细胞开始调亡,而小鼠肝脏自身开始恢复机能。最后,实验还比较了单个核细胞与CD34+细胞在小鼠体内的转化情况,研究发现单个核细胞中的CD34+细胞不能促进CD34+细胞的转分化。